微生物量碳氮.docVIP

微生物量碳 方法一 每个土样称取相当于 20g 烘干土重的 6 份新鲜湿土于100ml 烧杯中，其中三份作为对照，直接用 100ml 0.5 mol·L-1 K2SO4（87.13g定容到1L）浸提。另三份放入干燥器中熏蒸，干燥器底部放适量水（保湿）和三个 50ml 小烧杯，一个烧杯盛 25ml 1% NaOH溶液（1g NaOH加入99ml水），另两个各盛 25ml 无醇氯仿（投入少量沸石）。盖严干燥器盖，将干燥器置于通风橱内，抽真空，直至氯仿沸腾约 2min，而后置于25℃暗室中 24h，取出盛氯仿的小烧杯，盖严干燥器盖，反复抽真空以除去残余的氯仿。采用灭菌－提取法，从干燥器中取出土样，同对照一样放入150ml 三角瓶中，分别加入100ml 0.5 mol·L-1 K2SO4溶液，25℃下在往复式震荡机上振荡30min，过滤。滤液用德国产TOC仪测定土壤提取液全碳含量，以熏蒸和未熏蒸土壤提取液全碳含量的差值Fc乘以系数2.64得到土壤微生物碳的含量，计算公式为：方法二 一、基本原理 熏蒸提取法测定微生物碳的基本原理是：氯仿熏蒸土壤时由于微生物的细胞膜被氯仿破坏而杀死，微生物中部分组分成分特别是细胞质在酶的作用下自溶和转化为K2SO4溶液可提取成分（Joergensen,1996）。采用重铬酸钾氧化法或碳-自动分析仪器法测定提取液中的碳含量，以熏蒸与不熏蒸土壤中提取碳增量除以转换系数KEC来估计土壤微生物碳。二、试剂配制 （1）硫酸钾提取剂（0.5 mol?L-1）：取871.25 g分析纯硫酸钾溶解于蒸馏水中，定溶至10 L。（2）0.2 mol?L-1（1/6 K2Cr2O7）标准溶液：称取130℃烘2-3小时的K2Cr2O7（分析纯）9.806 g于1 L大烧杯中，加去离子水使其溶解，定溶至1 L。K2Cr2O7较难溶解，可加热加快其溶解。 （3）0.1000 mol?L-1（1/6 K2Cr2O7）标准溶液：取经130℃烘2-3小时的分析纯重铬酸钾4.903 g，用蒸馏水溶解并定溶至1 L。 （4）邻啡罗啉指示剂：取邻啡罗啉指1.490 g溶于含有0.700 g分析纯硫酸亚铁（FeSO4?7H2O）的100 ml蒸馏水中，此溶液易变质，应密闭保存于棕色瓶中。 （5）硫酸亚铁标准溶液（0.05 mol?L-1）：称取13.9 g分析纯硫酸亚铁（FeSO4?7H2O），溶于800 ml蒸馏水中，慢慢加浓硫酸5 ml（防止水解），定溶至1 L，保存于棕色瓶中。此溶液易被空气氧化，每次使用时必须标定其准确浓度。 硫酸亚铁溶液标定方法：吸取0.1000 mol?L-1（1/6 K2Cr2O7）标准溶液5.0 ml（浓度为0.05 mol?L-1，1/6 K2Cr2O7），放入150 ml的三角瓶中，加浓硫酸5 ml和邻啡罗啉指示剂2滴，用硫酸亚铁溶液滴定，滴至溶液由蓝绿色变为棕红色即为终点。根据滴到终点消耗的硫酸亚铁溶液量计算其准确浓度，即C2=(C1*V1)/V2。式中：C1——重铬酸钾标准溶液浓度（0.1000 mol?L-1） C2——硫酸亚铁标准溶液浓度（mol?L-1） V1——吸取的重铬酸钾标准溶液体积（5 ml） V2——滴到终点时消耗硫酸亚铁溶液体积（ml） （6）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1：2（V:V）加入分液漏斗中，充分摇动1分钟，慢慢放出底层氯仿于烧杯中。如此洗3次。得到的纯氯仿用无水氯化钙出去氯仿中的水分，于试剂瓶中在低温（4℃）黑暗状态可保存几周（Williamss等，1995）三. 操作方法（1）土样前处理： 新鲜土壤应立即处理或保存于4℃冰箱中，测定前仔细除去土样中可见植物残体（如根、茎和叶）及土壤动物（蚯蚓等），过筛（孔径2 mm），彻底混匀。处理过程应尽量避免破坏土壤结构，土壤含水量过高应在室内适当风干，以手感湿润疏松但不结块为宜（约为饱和持水量的40%）。土壤湿度不够可以用蒸馏水调节至饱和持水量的40%。次样品即可用于土壤实时测定。开展其他研究（如培养试验）可将土壤置于密闭的大塑料桶内培养7-15天，桶内应有适量水以保持湿度，内放一小杯1 mol?L-1 NaOH溶液吸收土壤呼吸产生的CO2，培养温度为25℃。经过前培养的土壤应立即分析。如果需要保留，应放置于4℃的冷藏箱中，下次使用前需要在上述条件下至少培养24小时。这些过程为消除土壤水分限制对微生物的影响，及植物残体组织对测定的干扰。 土壤饱和持水量测定可按Shaw（1958）的方法：在圆形漏斗茎上装一带夹子的橡皮管，漏斗内塞上玻璃纤维塞，取50g土壤于漏斗中，夹紧橡皮塞，加入50ml水保持30分钟，然后打开夹子并测