第十一 液相色谱.pptVIP

特点之二：高速度、高灵敏度和分离度 小颗粒所致的高柱效带来了显著的益处。通过缩短柱长或提高流速可获得高分离速度及高分离度。 增加柱效的另一个效应是增加灵敏度，这是由于在分离过程中减少了扩散，被分析物在检测点的浓度更高。 UPLC系统的特点 耐高压泵： 10cm长，1.7μm颗粒的色谱柱，达到最佳柱效时的流速，理论柱压约15000psi。因此需要可以在此压力下传送溶剂的泵。 进样系统： 传统进样阀不能承受这等高压。为保护色谱柱不受极端压力波动的影响，进样过程应该相对无压力波动。系统的死体积必须足够小，以降低样品的谱带展宽。 检测器系统： 理论上，使用1.7μm颗粒填料的UPLC系统可以产生半峰宽小于1秒的色谱峰。 检测器有非常高的采集信号速率，在整个色谱峰内捕捉足够的数据点，以得到准确、可重现的组份峰的确认。 检测器的流通池必须有尽可能小的扩散体积，以保持分离柱效。 理论上UPLC比HPLC的检测灵敏度高2~3倍。 11.6　实验技术 11.6.1 除气：真空脱气、吹氦脱气、超声波脱气? 11.6.2 装柱：干法装柱、湿法装柱? 11.6.3 衍生技术：柱前衍生、柱后衍生? e.g. 氨基酸的测定（无色的氨基酸经色谱柱分离后与衍生剂茚三酮反应，生成物在570nrn处有强吸收 ） 11.6.4 接口 11.6.5　条件选择 A、流动相流速 B、流动相组成 C、固定相 D、检测器 E、分析温度 11.6.6　梯度洗涤技术 仅用弱溶剂 仅用强溶剂 梯度洗提 本章要点 液相色谱的分类 反相色谱和离子交换色谱的机理 流动相的选择 检测器的选择 11.1 基本概念和术语 　　以液体为流动相的色谱法称为液相色谱。高效能固体细微粒为固定相，高压溶剂为流动相，配备高灵敏度检测器的液相色谱系统为高效液相色谱系统。 术语： A、被分离组份，被分离物质，溶质 B、 流动相，溶剂，洗脱剂 C、固定相包括：载体（担体）、涂层 D、流出液、洗出液 11.2 　分类和特点 分类： 分配色谱：经典液液分配色谱 　 化学键合相色谱（分配+吸附） 极性键合相色谱 非极性键合相色谱 （反相化学键合相、离子对色谱） * 硅胶基底的反相色谱 * 聚合物基底的反相色谱 11.2 　分类和特点 分类： 吸附色谱 离子交换色谱 阳离子交换色谱 阴离子交换色谱 离子色谱 体积排阻色谱 凝胶过滤色谱(极性固定相和流动相) 凝胶渗透色谱(非极性固定相和有机溶剂流动相) 特点： 　与经典LC比，快速、高效、高灵敏度 　与GC比，慢速，但可分离难气化物质 A. 高压：150-300 Kg/cm2 B. 高速：1-10 mL/min C. 高效：?5000 塔板/m D. 采用高灵敏度检测器 GC与HPLC的比较 GC 分析挥发性物质 (20%的化合物) 不能用于热不稳定物质的分析 毛细管柱有很高的柱效 灵敏的检测器如ECD和较灵敏的通用检测器FID和TCD 流动相为气体，无毒，易于处理 运行和操作容易 仪器制造难度较小?? GC与HPLC的比较 HPLC 几乎可以分析各种物质，包括热不稳定物质 色谱柱不能很长，柱效不会很高 缺少较高灵敏度的通用检测器（仅:蒸发光散射） 流动相可能有毒，费用较高 运行和操作较难 仪器制造难度大 11.3 反相色谱 11.3.1 保留和分离机理 　　以非极性键合或聚合物基底固定相为固定相，以极性溶剂为流动相，利用被分离组份在两相中的分配差异和在固定相上吸附的差异，使之彼此分离。 正向色谱和反相色谱的差异？ 11.3.2　固定相 以硅胶为基底的硅氧烷：C18、ODS、octadecylsilane 以聚合物为基底：PSDVB 11.3.3　流动相 乙腈、甲醇、乙醇、水（缓冲液）、及混合液 11.3.4 流出次序 极性大的先流出，基团小的先流出 11.4 离子交换色谱 11.4.1 保留和分离机理 　　以离子交换剂为固定相，借助于试样中电离组份对固定在交换剂基体上带相反电荷的离解部位亲合力的不同，使其彼此分离。 11.4.2　固定相 交联聚苯乙烯为基体的离子交换树脂 硅胶为基体的键合离子交换剂 强酸型、弱酸型、强碱型、弱碱型 ? 11.4.3　流动相 电解质溶液和缓冲液 ——参见经典离子交换色谱 一般用含盐的水溶液作为流动相，应满足以下几个条件：（1）能充分溶解各种盐并提供离子交换必需的缓冲液；（2）具合适的离子强度以控制样品的保留值；（3）对被分离的对象有选择性。 11.4.4　流出次序 与溶质有效电荷、原子序、二次平衡有关 M2+ + 4Cl- MCl42-