复杂性疾病的分子诊断12am.pptVIP

血红蛋白病 最早成功进行产前基因诊断 可分为两大类： 异常血红蛋白病（abnormal hemoglobin syndrome） 地中海贫血（thalassemia） 一、 遗传性疾病 1）异常血红蛋白病 珠蛋白基因突变（单硷基替代、缺失或插入等） 镰状细胞贫血： b-珠蛋白基因第6位密码子GAG→GTG (E6V) 该突变使限制酶MstII位点消失(CCTGAGG→CCTGTGG) 诊断方法： 限制性酶切图谱直接分析法 (基因组DNA或PCR产物) ASO 斑点印迹杂交分析法 (ASO = 等位基因特异性寡核苷酸探针) × MstⅡ酶切位点(GCTNAGG) 5′ 3′ 正常基因 5′ 3′ 突变基因 1.15kb 1.35kb 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 + ﹣ 0.2kb 1.15kb 1.35kb 正常人 突变携带着 患者 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 b-珠蛋白基因点突变 GAG(Glu)--GTG(Val)? bA probe ACTCCTGAGGAGAAGTCTGCC bS probe ACTCCTGTGGAGAAGTCTGCC? Hetero bA probe bS probe Homo Normal a-地中海贫血： 不同数量(1-4个)a-珠蛋白基因缺失或点突变等 a a ? 14kb BamHI BamHI aa/aa aa/-- aa/a- a-/-- --/-- 10kb 14kb 10kb a 2）地中海贫血 珠蛋白基因缺失或基因中某些硷基替代 → 影响a-或b-珠蛋白链的合成速率 → a-或b-地贫 诊断方法：PCR、酶切图谱法、PCR-ARMS、PCR-ASO b-地中海贫血 主要是b-珠蛋白基因点突变。 突变常不涉及限制酶识别位点 不能用限制性酶切图谱进行直接分析。 诊断方法： PCR-ARMS 间接检测病变基因 ASO 斑点印迹杂交分析 直接检测病变基因点突变 DNA芯片（包括各种基因突变位点的所有探针） 可快速、简便地检出所有已知突变 甲型血友病（血友病A） 凝血因子VIII（F VIII）缺乏所致， 发病的分子机制是F VIII基因突变，主要为点突变或少数硷基 的缺失和插入以及第22内含子的大片段倒位。 乙型血友病（血友病B） 起因于凝血因子IX的缺乏 其分子机制是分布于整个基因各处的多种形式的突变。 诊断方法：PCR/ASO直接检测法（点突变） PCR/RFLP连锁分析法（多种不定突变） （2）血友病（haemophilia） 严永敏 基础医学与医学技术学院 复杂性疾病定义 发病原因