皂甙类中药制剂制剂分析.pptVIP

皂甙类中药制剂制剂的分析 * 一、皂甙类成分的定性分析 (一)泡沫反应 取中药材粉末约1g，加水10ml，煮沸10分钟后过滤，将滤液于试管内强烈振摇，如产生持久性泡沫(15分钟以上)即为阳性反应。所产生的泡沫多少与pH有关，取2支试管，一管加入0.1mol/L盐酸液5ml，另一管加入0.1 mol/L氢氧化钠液5ml，再各加入中药水溶液，使酸管的pH为1，碱管pH为13，强烈振摇，如两管所形成的泡沫高度相同，则中药中含三萜皂甙，如碱管泡沫较酸管泡沫高数倍，则中药中含甾体皂甙。 (二)显色反应 1。醋酐-浓硫酸反应 取含皂甙样品置试管中，加醋酐1ml溶解后，沿试管壁加入少量浓硫酸，在两液层中间出现色环，甾体皂甙生成蓝色或蓝黑色，而三萜皂甙则出现红、粉红或紫色。 2．三氯醋酸反应 取皂甙溶液滴在滤纸条上，滴三氯醋酸试剂，加热到60℃，若斑点生成红色渐变为紫色，则样品为甾体皂甙；若需加热到100℃才出现以上颜色变化，则样品为三萜皂甙。 3．氯仿-浓硫酸反应 样品溶解于氯仿，沿管壁滴加浓硫酸后，在氯仿层呈现红或蓝色，并有绿色荧光出现。 4．冰醋酸-乙酰氯反应 样品溶于冰醋酸中，加入乙酰氯数滴及氯化 锌结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。 5．五氯化锑反应 样品加五氯化锑的氯仿液呈紫蓝色。 (三)薄层色谱 皂甙类成分进行薄层分离时采用吸附剂常用的是硅胶或氧化铝以及特殊需要的硅藻土。 亲水性强的皂甙通常要求硅胶的吸附活性较弱些，展开剂的极性要大些，才能得到较好的分离效果。常用的溶剂系统有：氯仿-甲醇-水(13∶7∶2，下层)、正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)等。 皂甙元的极性较小，如以硅胶为吸附剂，展开剂的亲脂性要求强烈，所用的溶剂系统常以苯、氯仿、己烷、异丙醚等为主要组分，再加以少量其他极性溶剂。常用的溶剂系统有环己烷-乙酸乙酯(1∶1)、苯-乙酸乙酯(1∶1)、氯仿-乙酸乙酯(1∶1)等。 薄层色谱后，皂甙类化合物常用的显色剂： (1)25％磷钼酸乙醇溶液：喷后置140℃加热5～10分钟，皂甙元均呈深蓝色，灵敏度高(0.5μg即能显色)，不易褪色。 (2)三氯化锑的浓盐酸或氯仿溶液：喷后在90℃烤10分钟，因有毒性，应在通风橱中进行，加热后不同的皂甙元在可见光或紫外光下显出不同种颜色，有助于鉴别皂甙元。 (3)硫酸-甲醇(1∶1)：喷后加热，显红褐色、紫色、黄色或黑色，与加热温度有关。 (4)氯磺酸-乙酸(1∶2)溶液：喷后130℃加热5分钟，各种皂甙元显不同颜色，如天蓝、紫、粉红、淡棕色等，在紫外光灯下也显不同荧光，比较灵敏，可检出10-1～10-3μg，可用于鉴别和定量。 (5)碘蒸气：灵敏度约为1～2μg，碘的优点是易挥发，显色后挥去碘，斑点可作定量分析，常用于确定斑点位置。 注：皂甙类化合物的薄层色谱鉴别往往要求控制相对湿度与温度，如三七皂甙在10℃以下展开，可与人参皂甙Re分开，在室温展开则不能使两者分开。一般可控制展开温度在20 ℃以下，相对湿度在47%左右。 实例 人参 三七 西洋参 的薄层鉴别 供试液制备 取本品粉末1g，加氯仿40ml，置水浴回流1小时，弃氯仿液，药渣挥干，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30min，取上清，加氨试液三倍量，摇匀，放置分层，取上层正丁醇液蒸干，加甲醇溶解制成1ml供试液。 对照液制备 取人参皂甙Rb1，Rb2，Rc，Re，Rd，Rg1，Rf对照品和伪人参皂甙 F11对照品，加甲醇制成每lml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。 薄层板 硅胶60预制板(Merck) 点样 供试液与对照液分别点样1ul 展开剂 氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15 ? 40 ? 22 ? 10)10℃以下放置后的下层溶液。 展开方式 展开剂预平衡15分钟；上行展开；展距：12-14cm 显色 喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热数分钟至斑点显色清晰， 置紫外光灯(365nm)下检视荧光色谱。 色谱识别 1.人参皂甙Rf为人参含有，西洋参不含，可作为人参与西洋参的区别依据之一；2．西洋参含的人参皂甙Fll，人参不含，可作为西洋参的鉴别特征；3.生晒参与红参之区别，在于Rgl以上的“微量皂甙”，红参较生晒参明显。4.三七色谱较简单，最明显的是Rbl，Re，Rgl三个主斑。需注意的是Re斑点与三七皂甙R1重叠。 样品：1-2．生晒参； 3-5．红参