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第二篇 物料处理和产物分离设备 第三章 萃取与色谱分离设备.ppt 26页

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第二篇 物料处理和产物分离设备 第三章 萃取与色谱分离设备 萃取方法 溶剂萃取; 双水相萃取; 萃取设备 溶剂萃取原理 萃取相与萃余相完全不互溶且能分离; 溶质很快在两相中达到平衡; 分配系数 K = 萃取相溶质浓度/萃余相溶质浓度 K 值越大, 分离效果越好 溶剂萃取的操作 单级萃取 错流萃取 逆流萃取 溶剂萃取的影响因素 萃取剂的选择; pH; 温度; 盐析, 带溶剂(助溶剂),去乳化 双水相萃取 PEG – 硫酸铵双水相萃取; 蛋白质的双水相萃取; 调整两相的浓度可分离不同的蛋白质 萃取设备 混合装置; 分离装置(离心机) 色谱分离技术 离子交换; 吸附交换; 亲和, 免疫, 分子筛层析 离子交换的速度 外扩散和内扩散 5 步交换传递过程, 水合层 树脂—(H+) + Na+ ? 树脂—(Na+) + H+ 色谱法的特点 分离效率高 选择性强 应用范围广 高灵敏度的在线检测快速 分离与过程自动化操作 设备简单,操作方便,不含强烈的操作 处理量小 操作周期长 难于实现连续操作 色谱分离的分类 按分离机理不同分类: 吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法、亲和色谱法 按固定相及流动相的状态分类:液相、气相 按操作方式分类:柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法等。 蛋白质的等电点和树脂选择 蛋白质的等电点(pI) 高pH, 蛋白质(--) 低pH, 蛋白质(+) 选用阴离子树脂 选用阳离子树脂 DEAE (Cl--) CM (Na+) 离子交换色谱 离子交换色谱(ion exchange chromatography, IEC)是基于离子交换原理进行的色谱分离。广泛用于生物大分子的分离纯化中。 柱操作系统和洗脱方式 蠕动泵 (N个) ? 层析柱 ? 检测记录仪 ? 组分收集器 恒定洗脱 (简单); 分步洗脱 (工业常用); 梯度洗脱 (分析常用) 标准的色谱峰 离子交换法的梯度洗脱 树脂的颗粒大小和交联度 树脂的颗粒大小决定树脂的交换能力, 交换速度和流体阻力; 树脂的交联度决定了树脂的内部孔径, 扩散能力(内扩散), 可吸附离子的大小和理化稳定性(强度). 其它吸附分离 范德华力的无选择吸附(物理吸附); 极性吸附 (HPLC); 疏水吸附 (HIC); 亲和吸附 (凝血素吸附,Lectin); 共价吸附 (二硫键的形成和解除); 免疫吸附 亲和色谱 亲和色谱是将与目的产物具有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相从混合物中分离目的产物的过程。 亲和作用是特殊的吸附作用。 凝胶层析(分子筛层析) 葡聚糖凝胶 (Sephadex); 大分子先流出, 小分子后流出 (与SDS相反); 交联度大小决定孔径大小; 大网络离子交换树脂和吸附剂 在树脂合成时人为添加微孔(~0.1um); 交联度高, 理化稳定性好; 可容许大分子进入树脂内进行交换; 可用于其它需要大比表面积催化反应的催化剂载体. * 分离效率高 色谱分离的效率是所有分离纯化技术中最高的。色谱分离的效率用理论塔板数表示。每个理论塔板的高度相当于固定相两个颗粒的距离。每米柱长可达几千至几十万的塔板数。这种高效的分离尤其适合于极复杂混合物的分离,由于分离效率高,通常使用的色谱柱长一般只有几十厘米。 可选操作参数多 ①可选择不同的色谱分离方法; ②可选择不同的固定相和流动相状态; ③可选择各种不同性状的物质作固定相或流动相; ④可选择不同的洗脱方法,如前沿分析、置换展开、洗脱展开等; ⑤可选择不同的操作条件,如温度、pH、离子强度和流动相速率等。 应用范围广 色谱分离的应用范围之广。从极性到非极性、离子型到非离子型、小分子到大分子、无机到有机及生物活性物质,以及热稳定到热不稳定的化合物,都可用色谱方法分离。尤其是对生物大分子样品的分离,是其他方法无法代替的。 高灵敏度的在线检测 在分离与纯化过程中,可采用不同的高灵敏度检测器进行连续的在线检测。 快速分离与过程自动化操作 用计算机作为操作的控制中心,使色谱分离过程可以按事先设置的程序进行完全自动化的操作,包括自动进样、分离后的样品自动收集。 这种高度的自动化操作保证了产品的质量,提高了产率,节省了大量的劳动力,降低了生产成本。 * 分离效率高 色谱分离的效率是所有分离纯化技术中最高的。色谱分离的效率用理论塔板数表示。每个理论塔板的高度相当于固定相两个颗粒的距离。每米柱长可达几千至几十万的塔板数。这种高效的分离尤其适合

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