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人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)定量检测试剂盒(ELISA).doc 6页

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PAGE \* Arabic 6仅供科研使用,不得用于临床诊断。仅供科研使用,不得用于临床诊断。仅供科研使用,不得用于临床检验。人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)定量检测试剂盒(ELISA)说明书【产品名称】通用名称:人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)定量检测试剂盒(ELISA)英文名称:Human Hepatitis B surface Antibody(HBsAb)ELISA KIT【包装规格】48人份/盒,96人份/盒【预期用途】仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)的浓度。【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)校准品和待测样本,再加入HRP标记的人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中人乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb))的浓度。【主要组成成分】主要成分组分数量主要成分校准品0.5ml/管*6管抗原配制的6个浓度标准品包被微孔板96T预包被固相抗体HRP标记抗体10mLHRP标记的检测抗体底物液A6mL过氧化脲工作液底物液B6mLTMB工作液20×浓缩洗涤液30mL含0.15%Tween20的PBS说明书1份--自封袋1个--不干胶2片--校准品浓度依次为:16、8、4、2、1、0 ng/ml。校准品已经通过测试,结果表明HBs抗原阴性,HIV1、HIV2和HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套8、质控品【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。 2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。【适用仪器】 半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。【样本要求】 样本类型和采集以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。样本保存和稳定性样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。【检验方法】试剂准备1、使用前,所有的组分都要至少复温120min,确保充分复温到室温。2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水,按1:20稀释,即1份的浓缩洗涤液,添加19份的蒸馏水。3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1体积充分混合,混合后15分钟内使用。操作程序1、所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。2、按前面试剂准备中描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。3、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。4、设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,样本孔加待测样本50μL,空白孔不加。5、除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗原100μL。6、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。7、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干。8、如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加

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