三种粉虱瞬时感受器离子通道基因的克隆 表达及在高温胁迫中的功能验证-cloning and expression of three transient receptor ion channel genes of whitefly and their functional verification under high temperature stress.docxVIP

I I 三种粉虱瞬时感受器离子通道基因的克隆、表达 及在高温胁迫中的功能验证 摘 要 温度是影响物种种群动态和扩散分布的重要因素，外来生物得以入侵成功，并暴发 成灾，其中一个重要原因是其对温度有较强的抵抗力。由瞬时感受器离子通道 (transient receptor potential, TRP) 介导的温度感知系统是影响昆虫温度感知的关键组成。研究温度 感知机制关键调控因子的功能可为明确温度感知以及温度适应调控机理提供理论依据。 本研究以烟粉虱Bemisia tabaci MEAM1隐种、MED隐种及温室粉虱Trialeurodes vaporariorum为研究对象，重点研究克隆了粉虱的TRP基因及其生物信息学特征，并对其 在高温胁迫下的功能进行了深入研究。主要结果和结论如下： 1、烟粉虱MEAM1隐种、MED隐种及温室粉虱TRP基因的克隆 本研究采用反转录 PCR 和 RACE 技术，首次克隆获得烟粉虱 MEAM1 隐种、MED 隐种 TRP 基因的 cDNA 全长序列及温室粉虱 TRP 基因的部分序列。生物信息学分析显 示其属于瞬时感受器离子通道家族成员，将其分别命名为 MEAM1 BtTRP、MED BtTRP 和 TvTRP。 2、温度胁迫下，烟粉虱MEAM1隐种和温室粉虱的TRP基因mRNA表达谱分析 本研究通过 qRT-PCR 分析烟粉虱 MEAM1 隐种和温室粉虱的 TRP 基因在不同温度 下 mRNA 的表达水平，结果显示，在低温 13 ℃条件下，两种粉虱 TRP 的 mRNA 表达 量均明显升高；高温胁迫下，烟粉虱 MEAM1 隐种的表达量最高的温度比温室粉虱高 7℃。 3、昆虫纲TRP基因的系统发育分析 构建系统发育进化树表明昆虫 TRP 在进化上相对比较保守，三种粉虱的 TRP 与豌 豆蚜 TRP2 的同源性较高，达到 75 %，且具有与其相同的氨基酸保守结构域。因此，推 测本研究克隆得到的 TRP 与豌豆蚜的 TRP2 属同一家族。 4、RNAi分析高温胁迫下TRP基因在烟粉虱MEAM1隐种中的作用 II II 通过饲喂 MEAM1 BtTRP 基因的 dsRNA，发现烟粉虱 MEAM1 隐种高温耐受力下降， 表现为高温胁迫下死亡率显著升高，说明 MEAM1 BtTRP 基因在烟粉虱 MEAM1 隐种高 温适应性方面起关键作用。 关键词：烟粉虱MEAM1隐种；烟粉虱MED隐种；温室粉虱；TRP基因；温 度感知；基因克隆 PAGE PAGE VI Cloning and Expression of Transient Receptor Potential Gene in Three Whiteflies and Their Function Identification under High Temperature Stress Li Qian (College of Agriculture, Guangxi University, Nanning 530004, China) Abstract The temperature is an important factor affecting species population dynamics and diffusion distribution. One of important reasons of the success of invasion and outbreak for alien invasive species is the high resistance to the temperature. Temperature sensing system mediated by the transient receptor potential (TRP) is a key component affecting the insects’ perception of temperature. Studying the function of the key regulation factor in the temperature sensing mechanism assists to clear the temperature perception and provide theoretical basis for the temperature adaptive regulation mechanism. This study targeted on Bemisia tabaci MEAM1 crytic specie, Bemisia tabaci MED crytic specie and Trialeurodes va