通路在创伤性脑损伤后神经再生中的作用机制课件.pptVIP

RHO/ROCK通路在创伤性脑损伤后神经再生中的作用机制;主要内容;立论依据;立论依据;立论依据;立论依据;图1 Rho/Rock经典信号通路;研究目标;（1）通过免疫组化和电镜观测Rho、ROCK、NF-κB、BDNF、NOGO-A等在对照组（假手术组）及实验组（颅脑损伤动物模型组）SD大鼠大脑皮层、下丘脑、垂体、脑干、损伤处及周边区脑组织中的分布特征和定位规律，以寻找组织学根据； （2）通过分子生物学手段（如PCR）测定对照组及实验组大鼠大脑皮层、下丘脑、垂体、脑干、损伤处及其周边脑细胞中Rho、ROCK、NF-κB、BDNF、NOGO-A等的基因表达水平。 （3）取大鼠大脑中动脉（MCA）做Rho激酶活性、MLCP活性、MLCK活性及MLC磷酸化水平测定。 （4）观察干预措施（Rho激酶抑制剂）对上述（1）~（3）变化的影响； （5）上述几项中改变和变化的相关性分析。;（1）未干预TBI组： 实验采用SD大白鼠（山西医科大学实验动物中心提供），体重270-290g，乌拉坦腹腔注射（1.2mg·kg-1）麻醉满意后，将大鼠固定在脑立体定位仪上（ST-T型，日本成贸公司）。制作TBI模型时沿正中线切开头皮并剥离骨膜,切口长2cm，暴露右顶骨，牙科台式电钻(宁波医疗器械厂)于冠状缝后1.5mm,中线右旁2.5mm处钻一直径为5mm的圆形骨窗,保持硬脑膜完整，将撞杆头端置骨窗处,击锤（重20g）沿外周导管分别从10cm、30cm高处自由落下冲击撞杆,造成右顶叶轻、中度脑挫伤,另用击锤（重40g）沿外周导管从25cm高处自由落下冲击撞杆,造成右顶叶重度脑挫伤,致伤冲击力分别为0.028N·s、0.048 N·s和0.088 N·s，硬膜保持完整，骨蜡封闭骨窗。TBI组按损伤程度分为轻、中、重三组。于伤后0.5、6、12、24、48、72h断头取血，开颅取脑，进行如下实验： ;;①免疫组化和电镜观测Rho、ROCK、NF-κB、神经营养因子、NOGO-A等在对照组（假手术组）及实验组（颅脑损伤动物模型组）SD大鼠大脑皮层、下丘脑、垂体、脑干、损伤处及周边区脑组织中的分布特征和定位规律，以寻找组织学根据； ②通过分子生物学手段（PCR）测定对照组及实验组大鼠大脑皮层、下丘脑、垂体、脑干、损伤处及其周边脑细胞中Rho、ROCK、NF-κB、神经营养因子、NOGO-A、等的基因表达水平； ?取大鼠大脑中动脉（MCA）做Rho激酶活性、MLCP活性、MLCK活性及MLC磷酸化水平测定。 ;（2）干预TBI组： 撞击鼠脑后使用Rho激酶抑制剂（Hydrochloride Fasudil、 Y-30141 ）、 NF-KB抑制剂-PDTC、神经营养因子等对TBI组上述3项改变的影响。各种干预措施（如 Rho激酶抑制剂-Y-30141 、NF-KB抑制剂）对神经损伤修复的影响 （3）统计学分析 上述各项中改变和变化的相关性分析。 ;技术路线图;拟解决的关键问题 （1）大鼠大脑中动脉的分离，需要显微镜下仔细操作，技术要求高，我科实验室有实验用手术显微镜并有老师指导，仍需要不断练习，提高显微操作技能。 （2）各种干预措施（如 Rho激酶抑制剂-Y-30141 、NF-KB抑制剂）对神经损伤修复的影响，国内外前期研究少，需要不断摸索实验条件。; （1）项目的设计构思是建立在以往工作基础上，是国家自然基金的后续深入研究，现已建立了稳定的实验动物模型和实验方法，并且已开展有关方面的研究，得到初步结果；（有前期研究基础） （2）本项目采用成熟的动物模型，成熟的分子生物学、放射免疫学、病理学技术；（在方法学方面是可行的） （3）本人的指导老师和项目组成员有长期科研实践经验，为本课题提供技术和理论指导； （4）项目申请人所在学科有专用实验室，所在实验室和所在单位拥有课题相关的实验设备，导师课题经费充足， 实验动物及相关试剂均可购买到。（实验条件具备，可以确保实验如期完成）;（1）关于Rho/ROCK信号转导通路在TBI后神经源性炎症中的作用机制目前尚未见相关文献报道。 （2）关于Rho/ROCK信号转导通路在调控TBI后神经再生和功能修复微环境中的作用机制，目前尚未见相关文献报道。 （3）关于多种干预方法（Rho激酶抑制剂、NF-KB抑制剂、NPY-受体阻抑、NK1-受体阻抑、干细胞细胞移植等）在颅脑损伤期对Rho/ROCK信号转导通路的影响机制，尚未见相关文献报道。;（1）2015年01月份～2015年4月份：完成假手术组的免疫组化、电镜 和分子生物学实验。 （2）2015年5月份～2015年8月份：完成颅脑损伤未干预组的免疫组化、电镜 和分子生物学实验。 （3）2015 年9月份～2015年12月份：完成颅脑损