二章节酶促应动力学.ppt

2.1 酶促反应动力学的特点 2.1.1 酶的基本概念 一、酶作为催化剂的共性 二、酶的生物催化特性 三、酶的调节功能 2.1.2 酶的稳定性及应用特点 一、酶的稳定性 二、酶的应用特点 2.1.3 酶和细胞的固定化技术 一、固定化技术的基本概念 二、固定化酶的特性 三、固定化细胞的特性 四、酶和细胞的固定化技术 2.1.4 酶促反应的特征 一、优点： 常温、常压、中性范围（个别除外）下进行反应； 与一些化学反应相比，省能且效率较高； 专一性好； 反应体系较简单，反应过程的最适条件易于控制等。 二、不足， 多限于一步或几步较简单的生化反应过程； 一般周期较长。 2.2 均相系酶促反应动力学 2.2.1 酶促反应动力学基础 一、零级反应 二、一级反应——即酶催化A→B的过程 三、二级反应，即A + B → C 对于连锁反应，如， 2.2.2 单底物酶促反应动力学 一、米氏方程 efree S x efree P 根据质量作用定律，P的生成速度可表示为 三点假设 1、底物浓度S 远大于酶的浓度efree ，因此x的形成不会降低底物浓度S ，底物浓度以初始浓度计算。 2、不考虑P + E → ES这个可逆反应的存在。要忽略这一反应，必须是产物P为零，换言之，该方程适用于反应的初始状态。 3、ES → E + P是整个反应的限速阶段，也就是说E + S = ES的可逆反应在初速度测定时间内已达到平衡。ES分解生成产物的速度不足以破坏这个平衡。 式中rs为底物消耗速度（负号表示减少）； rp为产物生成速率； Ks为平衡常数,其又称饱和常数（saturation constant）。 利用稳态法获得米氏方程，同样基于三点假设。其中第（1）和（2）两点与快速平衡法一致，第三点是在基于底物浓度比酶的浓度高得多，中间复合物ES分解时所得到的酶又立即与底物结合，使中间复合物浓度维持不变。即在这段时间里，x的生成速率与x的消失速率相等，达到动态平衡，即所谓“稳态”。 在实际的酶促反应中，人们关心的是反应时间与底物转化率的关系．所以，基于t=0，S=S0初值积分得 第二章 酶促反应动力学 2.1 酶促反应动力学的特点 2.1.1 酶的基本概念 2.1.2 酶的稳定性及应用特点 　 酶是以活力、而不是以质量购销的。 酶有不同的质量等级：工业用酶、食品用酶、医药用酶。酶的实际应用中应注意，没有必要使用比工艺条件所需纯度更高的酶。　　　 经典酶学研究中，酶活力的测定是在反应的初始短时间内进行的，并且酶浓度、底物浓度较低，且为水溶液，酶学研究的目的是探讨酶促反应的机制。 工业上，为保证酶促反应高效率完成，常需要使用高浓度的酶制剂和底物，且反应要持续较长时间，反应体系多为非均相体系，有时反应是在有机溶剂中进行。 2.2 均相酶促反应动力学 2.2.1 酶促反应动力学基础 　　可采用化学反应动力学方法建立酶促反应动力学方程。 对酶促反应 　　　　　 ，有： 对连锁的酶促反应，　　　　　　 2.2.2 单底物酶促反应动力学 2.2.2.1 米氏方程 　　 根据酶－底物中间复合物假说，对单底物酶促反应　　 ，其反应机制可表示为：　 快速平衡法推导动力学方程： 几点假设： （1）CSCE，中间复合物ES的形成不会降低CS。 （2）不考虑这个可逆反应。 （3） 为快速平衡， 为整个反应的限速阶段，因此ES分解成产物不足以破坏这个平衡。 解之，得 稳态法推导动力学方程： 几点假设： （1）CSCE，中间复合物ES的形成不会降低CS。 （2）不考虑这个可逆反应。 （3）CSCE中间复合物ES一经分解，产生的游离酶立即与底物结合，使中间复合物ES浓度保持衡定，即 。 解之，得 米氏方程 对米氏方程的讨论： 当CSKm时，　　 ，属一级反应。 当CSKm时，　　，属零级反应。 当CS＝Km时，　　。Km在数量上等于反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 双倒数法(Linewear Burk): 对米氏方程两侧取倒数，得 ,以 作图，得一直线，直线斜率为 ，截距为 ,根据直线斜率和截距可计算出Km和rmax。 图2－2 双倒数法求解Km和rmax 2.2.2.2 抑制剂对酶促反应速率的影响 失活作用 抑制作用 竞争