试验六豚鼠T淋巴细胞的测定——兔红细胞玫瑰花环试验玫瑰花环.DOC

实验六?? 豚鼠T淋巴细胞的测定 ——兔红细胞玫瑰花环试验 玫瑰花环试验，又称为花结试验。是测定淋巴细胞数量和功能的一种方法。 人类T和B淋巴细胞表面具有不同的受体。由于人类T淋巴细胞表面具有与绵羊红细胞结合的受体，能与绵羊红细胞非特异性结合，形成E花环，因此，T细胞也成为红细胞花瓣形成细胞。根据E—玫瑰花环形成率，可以间接判断机体细胞免疫力。目前，已广泛应用于临床，作为测定人群免疫状态的一个指标。 材料： 1.???? 肝素（100单位/毫升） 2.???? 0.5%兔红细胞悬液（用Hanks液配制） 3.???? 吸收过的胎牛血清： 取经56℃30分钟加热灭活后的胎牛血清加半量压积兔红细胞混合后，37℃水浴20分钟，2000转/分离心10分钟，取上清液即成。 4.???? Hanks液 5.???? 豚鼠抗凝血 6.???? 淋巴细胞分层液 7.???? 灭菌注射器，针头，试管，吸管等。 方法： 1.????????? 淋巴细胞提取 （1）???????????? 取豚鼠抗凝血2毫升，加3毫升Hanks液使之稀释。加于3毫升淋巴细胞分层液液面之上（沿管壁轻轻加入，勿使两液相混）。 （2）?????????? 2000转/分离心30分钟，吸淋巴细胞层到另一试管中加5倍体积的Hanks液洗1—2次，（1500转/分离心10分钟）弃上清即成。 图8 用分层液离心后的血细胞层 ? 2.