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牛超数排卵的研究进展 　　摘要：就牛超数排卵应用中常用的激素及改进超数排卵的措施进行综述，以提供简化有效的方法，为牛的超排和胚胎移植提供有价值的参考。 　　?P键词：牛；超数排卵；雌二醇；卵泡消融 　　中图分类号：S857.2+1；S823 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2018）01-0012-03 　　超数排卵、人工授精、胚胎移植等繁殖生物技术广泛用于改善各种家畜的生产特性[1，2]。超数排卵技术是目前应用比较广泛的一种技术，其目的是尽可能的诱导胚胎移植或者使怀胎数量达到最大。虽然有报导称超数排卵可以采取很多方式获取卵母细胞，已经在不同品种的动物中广泛使用并且可以得到可观的胚胎数量[3]，但仍然存在许多问题。牛群体双胎遗传率和排卵遗传力低，分别为0.03和0.07[4]。因此，如何提高母牛的繁殖性能一直是研究的焦点。事实上，超数排卵技术已经成为利用胚胎移植得到大量优良基因的一个重要手段。近期已在卵巢生理学、卵巢功能和促性腺激素的研究上取得了相当大的进展，但是超排卵反应的不可预测性仍然是影响繁殖效率和胚胎移植一个重要问题。 　　1 牛的超数排卵 　　牛超数排卵旨在不损害供体与卵母细胞成熟、排卵、受精、胚胎发育相关过程情况下，对供体进行处理，以增加排卵率及可用胚胎数。雌性哺乳动物的卵巢中只有一小部分卵母细胞可以排卵。排卵在发情后开始，妊娠期间终止。在这期间，牛由于妊娠和哺乳期的压力，生产期相对较短，每年排卵数可能低至4～5[5]，一头奶牛最理想的状态是每年生产一头小牛。由于卵巢对性腺激素的反应因动物种类不同而有较大差异，且同一种动物种类中个体间差异极大，因而发育的卵泡数、排卵数及受精率等也不尽一致[6]，人们期望通过超排的方式在一个卵泡波中发育出更多的生长卵泡，尽可能排卵整齐，提高受精率和增加可用的胚胎数，从而达到提高超排效率和经济效益的目的。但在超排后，有15%～20%的供体牛产生的胚胎不能用于移植[7]。这主要是因为注射的外源促性腺激素影响着卵母细胞的成熟、受精以及早期胚胎在输卵管和子宫内的发育。 　　2 超数排卵中常用的激素 　　2.1 马绒毛膜促性腺激素 　　羊、马、牛和猪垂体前叶抑制剂的使用早有研究，报道[2]称马绒毛膜促性腺激素（eCG）的使用已经成为标准方法。Betteridge[8]的研究表明，马绒毛膜促性腺激素用于牛胚胎移植早已达成普遍的共识，马绒毛膜促性腺激素必须从黄体卵泡过渡期间给予到受体动物体内，在发情周期过程中约第16天时，动物黄体自然溶解。Hafez等[9]试验结果表明，应用最广泛的是发情周期第16天时给予供体牛2 000～3 000 U的马绒毛膜促性腺激素，其次是在第19天和第20天的时候给予10 mg 17 β-雌二醇或者在第21天给予2 000 U绒毛膜促性腺激素。给予这些激素的目的是要确保黄体溶解，更重要的原因是让大多数供体表现出发情现象[2]，这是超数排卵的早期标准方法。早在19世纪70年代前列腺素商业制剂已经被应用于超数排卵试验上。Elsden等[10]表示，在马绒毛膜促性腺激素处理48 h后，应用前列腺素后超数排卵率比在第16天时给予马绒毛膜促性腺激素高。前列腺素的使用意味着在发情周期的其他时间也有可能引发促性腺激素作用。事实上，Phillippo等[11]认为8～12 d时给予马绒毛膜促性腺激素，与在发情周期的其他时间给予马绒毛膜促性腺激素相比有更高效的超排反应，之后有研究表明这可能与接近次级卵泡波出现的时间有关[12]。 　　2.2 雌二醇和孕激素 　　选择性地诱导卵泡波出现可以不考虑发情周期就开始超排卵周期，且不需要检测发情，只需在8～12 d开始时给予促性腺激素[13]。在20世纪90年代，研究表明孕激素和雌二醇可以诱导一个新的卵泡波同步出现[14]；使用这种方法进行母牛排卵诱导已经有了广泛的报道[13，15]。使超排卵周期同步出现新的卵泡波最常用的方法给予2.5～5.0 mg 17β-雌二醇或者2.5 mg苯甲酸雌二醇加100或50 mg孕激素，通常使用肌肉注射[14，15]。采用雌二醇处理后的母牛抑制了促卵泡素的释放，导致卵泡闭锁。平均处理4 d后，雌二醇被代谢，一个新的卵泡波出现[14]。即促性腺激素在雌二醇处理4 d后起作用。这种方法可以同时生长一个全新的3～5 mm的卵泡。虽然可移植胚胎数并不总是大于奶牛发情后8～12天超排卵数，但是给予供体母牛雌二醇和孕激素后超排卵的受精率明显高于对照组中的奶牛[14，16]。此外，在没有应用雌二醇而应用孕激素之后，母牛超排卵4 d，得到受精卵和可移植胚胎的百分比与在孕激素注入时用雌二醇处理的情况下相比较低。这些结果表明，外源性卵泡刺激素的应用不仅可诱导卵泡健康成长而且对于那些已经处于闭锁状态