人脐带间充质干细胞的研究进展及应用.docVIP

人脐带间充质干细胞的研究进展及应用 　　[摘 要]人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）具有低免疫原性，自我更新、增殖和多向分化的潜能；hUCMSCs具有来源广泛、可塑性强、对供者无不利影响、无伦理限制问题等优势，使其成为组织工程、造血干细胞移植、细胞治疗和基因治疗中极具潜力的种子细胞，在研究及临床应用方面也有十分广阔的前景。 　　[关键词]人脐带；间充质干细胞；移植治疗 　　中图分类号：S785 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）02-0324-02 　　间充质干细胞（MSCs）根据其来源主要分为，骨髓间充质干细胞（BMSCs）、脂肪间充质干细胞（ADMSCs）和脐带间充质干细胞（UCMSCs）。脐带间充质干细胞（UCMSCs）的特性类似于骨髓间充质干细胞（BMSCs），因其增殖和分化潜能比BMSCs更高，获取过程为非侵袭性，来源丰富、取材方便而成为科研和临床工作中干细胞的一个较好来源。本文就近几年国内外关于hUCMSCs的研究现状和应用进行了综述。 　　1 hUCMSCs的来源 　　人脐带由三部分构成：羊膜被覆上皮、脐血管和位于两者之间被称为华氏胶的胚胎黏液结缔组织。Mitchell[1]首次从华氏胶中提取出一种成纤维样细胞，并证实了该类细胞具有多向分化的潜能。Romanov 等首先证明了脐带组织中含有干细胞。随后多位研究者从脐带华氏胶中分离到这种成纤维样细胞，证实其具有自我更新、增殖和多向分化的潜能，并命名为人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）。 　　2 hUCMSCs的分离培养 　　2.1 hUCMSCs的分离 　　目前hUCMSCs 的分离方法主要有组织块贴壁法和酶消化法两种。其中，在分离培养的早期，酶消化法获得的细胞数量更多，但含有其他类型的细胞，需要标记分离纯化；组织块贴壁法操作比较简单，且传代后的细胞形态及增殖活性更加稳定，污染机会更小，培养体系中几乎没有造血细胞、内皮细胞或平滑肌细胞等。 　　2.2 hUCMSCs的培养 　　常用的hUCMSCs培养基为α-MEM或者低糖DMEM中加10%的胎牛血清、生长因子、抗生素和营养物质等，在5%CO2、37℃及饱和湿度的培养箱中培养，2～3d需要更换一次培养液，原代培养大约2周，当贴壁细胞80～90%融合时，就可按1：3进行传代培养，2～3d后就可得到较为纯净且均匀一致的细胞系。研究显示，酸性培养基Mesencult更有利于脐带血细胞的生长，并能形成克隆；经低强度脉冲式超声波处理的脐带及传代细胞，在同等条件下能获得对照组3倍数量的细胞，并且细胞的扩增能力明显增强，但持续的低强度超声波反而会降低细胞的增殖能力[2]。 　　3 hUCMSCs的生物学特性 　　3.1 hUCMSCs的细胞形态 　　分离得到hUCMSCs后，培养24h，可在倒置显微镜下观察到贴壁形态相对均一的梭形细胞，呈平行排列生长或者旋涡状生长，在低密度时较扁平，密度增加趋于融合时细胞就变得细长，也可观察到多角形的细胞。扫描电镜下观察到细胞呈长条状纤维样，表面不光滑，细胞有小结节状物，无明显突起，细胞间无网状连接。 　　3.2 hUCMSCs的生长、增殖特点 　　细胞的原代培养一般需要10～14d，待细胞融合达80%后进行传代培养，接种后2～4d增长趋势最为明显。对细胞周期分析发现，第2～6代的hUCMSCs为正常的二倍体细胞，80%的细胞处于G0～G1期，处于活跃增殖期的细胞较少。早期细胞生长呈增长的趋势，潜伏期一般不超过36h，之后进入对数增长期，一般持续到第6～8d，之后进入平台期，呈现典型的“S”型增长方式。 　　3.3 hUCMSCs的免疫表型及免疫标记 　　目前研究发现，hUCMSCs没有特异的表面抗原，但可形成表面蛋白作为抗原标记，4～8代的hUCMSCs表面标记较为稳定。通常hUCMSCs高表达间充质干细胞标记和黏附分子标记，低表达移植相关的表面标记MHC-I类分子标记等，弱表达CD106，不表达造血干细胞标记、内皮细胞标记、单核巨噬细胞表面标记CD14及与淋巴功能相?P的抗原lαCD11a，也不表达MHC-Ⅱ类分子标记及CD80、DC86等HLA抗原识别有关的共刺激因子。大量研究表明hUCMSCs是更原始的间充质干细胞群，可能具有更强的可塑性和极低的免疫原性，类似于稀少的成人多能祖细胞。 　　3.4 hUCMSCs的免疫原性 　　hUCMSCs具有极低的免疫原性和诱导免疫耐受能力。研究发现，hUCMSCs低表达HLA-ABC，不表达HLA-DR，也不表达共激分子CD80和CD86，而细胞表面共激分子是T细胞活化剂增殖过程中必需的信号系统。在小鼠试验中发现，UCMSCs不刺激小鼠淋巴细胞增殖，还可以显著抑制小鼠淋巴细胞的反应。以