2017年高中生物第1章基因工程第1节基因工程概述(第2课时)学案苏教版选修3.docVIP

第2课时　基因工程的实施过程 1．简述基因工程的一般过程。 2．理解获取目的基因的方法。(重、难点) 3．掌握将目的基因导入受体细胞的方法。(重点) 4．掌握目的基因的检测和鉴定方法。(重点) 　获取目的基因和构建基因表达载体 1．获取目的基因 (1)通过基因文库获取目的基因： ①基因文库的含义：将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片段，分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。这个受体菌群体就被称为基因文库。 ②种类： a．基因组文库：含有一种生物所有的基因。 b．部分基因文库：含有一种生物的一部分基因。 (2)利用PCR技术扩增目的基因： ①原理：DNA分子半保留复制。 ②场所：生物体外(PCR仪)。 ③优点：操作简单、容易掌握、结果可靠、较短时间内大量扩增。 ④发明家：美国科学家穆里斯。 (3)通过化学方法直接人工合成目的基因： ①仪器：DNA合成仪。 ②基因特点：比较小、脱氧核苷酸序列已知。 2．构建基因表达载体 (1)目的：使目的基因进入受体细胞并有效表达，能稳定存在且遗传给后代。 (2)组成：一个基因表达载体除了目的基因外，还应包括启动子、终止子和标记基因等。 eq \a\vs4\al([合作探讨]) 基因表达载体的构建是基因工程的核心，下面图1为基因表达载体的构建过程图，图2为基因表达载体模式图。请据图分析： 图2 探讨eq \a\vs4\al(1)：图1中的①是什么物质？切割目的基因和载体要选用同一种①吗？为什么？ 提示：限制性核酸内切酶。选用同一种①，因为：选用同一种限制性核酸内切酶切割会产生相同的黏性末端，可以在DNA连接酶的作用下将切割的目的基因和载体连接起来。 探讨eq \a\vs4\al(2)：图1中②是什么物质？试探讨用②连接目的基因和载体DNA时产生几种可能的连接方式？哪一种是符合要求的连接方式。 提示：DNA连接酶。可能有3种连接方式，即目的基因和目的基因相连、载体DNA和载体DNA相连、目的基因和载体DNA相连。其中符合要求的是目的基因和载体DNA相连形成的重组DNA分子。 探讨eq \a\vs4\al(3)：图2中的抗生素抗性基因属于什么基因？能否将目的基因插入该基因中？为什么？ 提示：标记基因。不能。标记基因用于鉴定受体细胞是否成功导入目的基因，以便将含目的基因的细胞筛选出来，若有目的基因插入，则标记基因被破坏，无法进一步筛选。 eq \a\vs4\al([思维升华]) 1．获取目的基因 (1)来源。 目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工方法合成。 (2)具体方法。 ①从已有的物种中分离：从基因文库中提取目的基因。 ②化学合成法：对于比较小，核苷酸序列已知的目的基因一般用人工合成的方法。如已知氨基酸序列，合成DNA。 eq \x(蛋白质的氨基酸序列)eq \o(――→,\s\up15(推测))eq \x(mRNA的核苷酸序列)eq \o(――→,\s\up15(推测))eq \x(结构基因的核苷酸序列)eq \o(――→,\s\up15(化学),\s\do5(合成))eq \x(目的基因) ③反转录法：它是以目的基因的mRNA为模板，合成碱基互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA。 eq \x(目的基因的mRNA)eq \o(――→,\s\up15(反转录))eq \x(单链DNA)eq \o(――→,\s\up15(合成)) eq \x(双链DNA即目的基因) ④利用PCR技术扩增目的基因。 a．PCR的含义：一项在生物体外通过酶促反应有选择地大量扩增目的基因或DNA序列的技术。 b．目的：短时间内大量扩增目的基因或DNA序列。 c．原理：DNA分子半保留复制。 d．特点：操作简单、易掌握、结果可靠，能在短时间内大量复制目的基因或DNA序列。 e．步骤：第一步，向离心管加入模板、原料、引物及Taq DNA聚合酶。 第二步，加热至94 ℃，双链DNA解旋为单链DNA。 第三步，冷却至55 ℃，引物与两条单链DNA上的特定部位相互配对。 第四步，加热至72 ℃，热稳定DNA聚合酶(Taq聚合酶)从引物起始进行互补链的合成。 如此重复循环多次。 f．特点：指数形式扩增。 2．PCR技术扩增目的基因与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原则 碱基互补配对 原料 四种脱氧核苷酸 条件 模板、ATP、酶 不同点 解旋方式 DNA在高温下 变性解旋 解旋酶催化 场所 体外复制 细胞核内 酶 热稳定的DNA 聚合酶(Taq聚 合酶) 细胞内含有的 DNA聚合酶 结果 在短时间内形成 大量的DNA片段 形成整个DNA 分子 特别提醒] 提取目的基因的三种方法的应用情况 (1)如果不知道目的基因的核苷