探讨巨噬细胞trem-1通路和淋巴细胞tim-3通路在脓毒血症发病中的作用机制-to investigate the mechanism of macrophage trem - 1 pathway and lymphocyte tim - 3 pathway in the pathogenesis of sepsis.docxVIP

全文缩略词英文缩写英文全称中文TREM-1Triggeringreceptorexpressedonmyeloidcells1髓细胞触发受体1ELISAEnzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验TNF-αTumornecrosisfactorα肿瘤坏死因子αMCP-1Monocytechemotacticprotein1单核细胞趋化蛋白1Tim-3Tcellimmunoglobulinandmucindomain3T细胞免疫球蛋白粘蛋白3Galectin-9Galactose-specificsolublelectin9半乳糖苷凝集素9IFN-γInterferonγ干扰素γG-CSFGranulocytecolony-stimulatingfactor粒细胞集落刺激因子MIP-2Macrophageinflammatoryprotein2巨噬细胞炎性蛋白2TGF-βTransforminggrowthfactorβ转化生长因子βLPSLipopolysaccharide脂多糖DCDendriticcells树突状细胞IL-1Interleukin1白介素1IL-4Interleukin4白介素4IL-6Interleukin6白介素6IL-17Interleukin17白介素17SPFSpecificpathogenfree无特殊病原PBSPhosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液CFUColony-formingunit克隆形成单位LBLuriabrothLuria培养基FSCForwardscatter前向散射光SSCSidelightscatter侧向散射光MFIMeanfluorescenceintensity平均荧光强度MSTMeansurvivaltime中位生存时间摘要第一部分TREM-1通路在脓毒血症中的表达及机制研究[目的]研究TREM-1分子在脓毒血症各类炎性细胞上的表达及TREM-1通路在脓毒血症发病中的作用机制。[方法]构建BALB/c小鼠腹腔脓毒血症模型，收获腹腔细胞，应用流式细胞仪检测TREM-1分子在各类炎性细胞上的表达；分离正常小鼠腹腔巨噬细胞，加入铜绿假单胞菌共培养，在培养液中加入TREM-1融合蛋白封闭TREM1/DAP12通路，应用瑞氏染色技术检测巨噬细胞吞噬能力变化，应用ELISA技术检测巨噬细胞分泌炎性因子水平变化，应用实时定量PCR技术检测巨噬细胞表面协同刺激分子表达水平；构建BALB/c小鼠腹腔脓毒血症模型，使用TREM-1融合蛋白及对照IgG进行治疗，对脓毒血症小鼠生存时间进行统计；构建BALB/c小鼠腹腔脓毒血症模型，使用TREM-1融合蛋白及对照IgG进行治疗，24小时后处死小鼠，收获外周血用于分析血清中IL-1、TNF-α、MCP-1等炎性因子水平变化，收获腹腔细胞应用流式细胞仪检测CD40、CD86等协同刺激分子在巨噬细胞上的表达变化。[结果]TREM-1分子大量表达于小鼠中性粒细胞和巨噬细胞上，而在淋巴细胞上不表达，且在铜绿假单胞菌急性感染引起的脓毒血症模型中，TREM-1分子在巨噬细胞及中性粒细胞上的表达明显增高；使用TREM-1融合蛋白阻断该通路后显著延长脓毒血症小鼠死亡时间；使用TREM-1融合蛋白阻断该通路后在体内外均能显著降低巨噬细胞分泌IL-1、TNF-α、MCP-1等炎性因子能力，但对巨噬细胞吞噬功能无显著影响；使用TREM-1融合蛋白阻断该通路后在体内外均能显著降低其表面CD40、CD86等协同刺激分子表达，从而影响巨噬细胞抗原提呈功能。[结论]TREM-1通路表达于脓毒血症相关巨噬细胞与中性粒细胞，阻断该通路可以显著减少巨噬细胞释放IL-1、TNF-α等炎性因子能力，且显著降低巨噬细胞活化、抗原提呈功能，从而显著降低脓毒血症发生时过度放大的炎性反应，最终明显延长脓毒血症小鼠存活。[关键词]脓毒血症；巨噬细胞；TREM-1第二部分研究Tim-3信号通路和Th17细胞的相关性以及在肺炎克雷伯菌感染引起的肺炎中的作用[目的]研究Tim-3信号通路和Th17细胞的关系以及在急性肺炎发病时的作用机制。[方法]分离正常小鼠脾脏淋巴细胞，加入特定的细胞因子诱导T细胞向Th17细胞分化，一段时间后检测Th17细胞上Tim-3分子表达水平，且加入Galectin-9激活Tim-3通路后检测Th17细胞凋亡变化；建立BALB/c小鼠肺炎克雷伯菌急性肺炎感染模型，使用Galectin-9或对照PBS治疗急性肺炎小鼠，记录各组小鼠存活时间；建立BALB/c小鼠肺炎克雷伯菌急性肺炎感染模型，使用Galectin-9或对照PBS治疗急性肺炎小鼠，不同时间点处死小鼠并收获外周血血清检测IL-17、IFN-γ、IL-4、G-CS