吸烟对树突状细胞在哮喘免疫平衡中作用的影响及机制分析-effect of smoking on dendritic cells in immune balance of asthma and its mechanism analysis.docxVIP

山西医科大学博士学位论文 山西医科大学博士学位论文 PAGE PAGE III 中文摘要 第一部分 香烟烟雾暴露对哮喘大鼠肺组织树突状细胞表达的影响 及其与 Th1/Th2 平衡的相关性 目的：研究香烟烟雾暴露对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠肺组织树突状细胞（dendritic cells， DCs）、血浆及支气管肺泡灌洗液（BALF）中干扰素（interferon，IFN）-γ、白细 胞 介素（interleukin，IL ）-4、10、12 表达的影响，探讨吸烟加重哮喘气道炎症 的免疫学机制。 方法：50 只雄性 Wistar 大鼠随机分为对照组、哮喘组、烟雾暴露+哮喘组、布地奈德+哮 喘组、布地奈德+烟雾暴露+哮喘组，建立哮喘大鼠模型、哮喘大鼠烟雾暴露模型 以及布地奈德干预模型。收集 BALF 进行白细胞计数及分类。采用免疫组织化学法 测定肺组织 OX-62 染色阳性细胞（即 DCs）的数量及分布，免疫印迹法（Western blot） 测定肺组织 OX-62 蛋白的表达，酶联免疫吸附试验法（ELISA）测定血浆和 BALF 中 IFN-γ、IL-4、10、12 的表达。 结果： 1. BALF 白细胞数量及细胞分类比较 （1）与对照组[（9±3）×107/L、（1.25±0.51）%、（6.37±3.50）%]相比，哮喘组大鼠 BALF 白细胞数量、中性粒细胞、淋巴细胞比例[（68±8）×107/L、（9.36±2.35） %、（22.26±6.53）%]和烟雾暴露+哮喘组[（89±12）×107/L、（21.74±4.82）%、 （24.15±14.40）%]增加，差异均具有统计学意义（均 P0.01）； （2）与 哮喘 组 [ （1.07±0.39） %] 相比 ，烟雾 暴露 + 哮喘 组大 鼠 BALF 嗜酸 性 粒细 胞 [（4.50±1.63）%]减少，白细胞数量、中性粒细胞比例增加，差异均具有统计学意 义（均 P 0.01）； （3）与布地奈德+哮喘组[（26±6）×107 /L 、（2.76±0.93）%、（1.00±0.38）%]相比，布地 奈德+烟雾暴露+哮喘组大鼠 BALF 白细胞数量、中性粒细胞比例[（38±7）×107 /L 、 （4.19±0.81）%]增加，嗜酸性粒细胞比例[（0.28±0.14）%]减少，差异均具有统计 学意义（P0.01、P0.05 和 P0.01）。 2. 肺组织 DCs 数量和 OX-62 蛋白表达的比较 （1）与对照组[（6.6±2.6）个/mm 2]相比，哮喘组和烟雾暴露+哮喘组大鼠肺组织 DCs 数 量（[ 11.1±2.6）个/mm2 、（26.8±4.8）个/mm2]增加，差异均具有统计学意义（均 P 0.01）； 与哮喘组相比，烟雾暴露+哮喘组大鼠肺组织 DCs 数量增加，差异具有统计学意义 （P0.01）；与布地奈德+哮喘组[（7.6±2.3）个/mm2]相比，布地奈德+烟雾暴露+哮 喘组大鼠肺组织 DCs 数量[（15.7±2.6）个/mm 2]增加，差异具有统计学意义（P0.01）； （2）与对照组（0.37±0.06）相比，哮喘组和烟雾暴露+哮喘组大鼠肺组织 OX-62 蛋白表 PAGE PAGE IV 达（0.47±0.07、0.98±0.11）增加，差异均具有统计学意义（均 P 0.01）；与哮喘组 相比，烟雾暴露+哮喘组大鼠肺组织 OX-62 蛋白表达增加，差异具有统计学意义 （P0.01）；与布地奈德+哮喘组（0.40±0.05）相比，布地奈德+烟雾暴露+哮喘组大 鼠肺组织 OX-62 蛋白表达（0.61±0.05）增加，差异具有统计学意义（P0.01）。 3. 血浆和 BALF 中 IFN-γ和 IL-4 表达的比较 （1）与对照组[（143.83±21.31）pg/ml、（125.79±25.85）pg/ml）]相比，哮喘组大鼠血浆、 BALF 中 IFN-γ表达[（58.55±14.01）pg/ml 、（49.21±18.71）pg/ml]和烟雾暴露+哮喘 组大鼠血浆、BALF 中 IFN-γ表达[（9.69±3.74）pg/ml 、（10.89±9.67）pg/ml ）]减少， 差异均具有统计学意义（均 P 0.01）；与哮喘组相比，烟雾暴露+哮喘组大鼠血浆、 BALF 中 IFN-γ表达减少，差异均具有统计学意义（均 P 0.01）；与布地奈德+哮喘 组[（134.03±18.41）pg/ml、（119.04±18.79）pg/ml）]相比，布地奈德+烟雾暴露+哮 喘组大鼠血浆、BALF 中 IFN-γ表达[（100.96±15.24）pg/ml、（85.64±