顺铂联合乳酸杆菌在宫颈癌治疗中对免疫因子il-10、tgf-β1影响的实验研究-experimental study on the effect of cisplatin combined with lactobacillus on immune factors il - 10 and tgf - β 1 in cervical cancer treatment.docxVIP

中 中 文 摘 要 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 顺铂联合乳酸杆菌在宫颈癌治疗中对免疫因子 IL-10、TGF-β1 影响的实验研究 摘 要 目的：.宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，是导致女性死亡的第二大 癌症。目前中、晚期宫颈癌的治疗仍无统一有效的方法。目前，大部分的 观点认为由于肿瘤微环境中免疫抑制因素的存在，使得传统的放、化疗无 法降低患者的死亡率，且其无法避免的毒副作用大大降低了患者的生存质 量。肿瘤细胞处在肿瘤微环境中可以分泌出各种免疫抑制性因子，比如 IL-10 以及 TGF-β1 等；而怎样才能够有效减少或消除肿瘤微环境里面的 免疫抑制因素，提高治疗效果，是当前肿瘤治疗领域亟待解决的重要问题。 乳酸杆菌为女性阴道的正常优势菌群，对维持阴道正常生态平衡起着 关键作用，多项研究结果显示，阴道微生态平衡失调与宫颈癌的发生具有 密切的联系。在乳酸杆菌数量降低的情况下，会使得阴道混合性厌氧菌或 者是加德纳菌增殖速度加快，形成大量有害物质，并和其他致癌因素（如 HPV）联合作用于宫颈，加速了宫颈癌的发展。 那么乳酸杆菌联合顺铂治疗宫颈癌是否可以降低或消除肿瘤微环境 中免疫抑制因素、增强治疗效果？本次研究将为宫颈癌的治疗提供新的视 角。 方法： 1 体外实验 1.1 培养宫颈癌 U14 细胞及乳酸杆菌。 1.2 用顺铂、乳酸杆菌、顺铂+乳酸杆菌刺激宫颈癌 U14 细胞，对照组为 PBS。24h、48h、72h 收集细胞，观察 U14 细胞中 TGF-β1、IL-10mRNA 的表达。 2 体内实验 取 4?6 周龄的雌性 C57BL/6 小鼠 40 只，随机分为 4 组，每组 10 只。 取对数生长期 U14 细胞 2×106 个/0.2ml 分别接种于每组小鼠，部位为背部 皮下。在接种第八天之后进行抑瘤实验。对照组腹腔注射 PBS0.2ml/只， 乳酸杆菌组给予乳酸杆菌 2.25*106/0.2ml/只肿瘤周边进行多部位注射，顺 铂组给予顺铂腹腔注射 0.2ml/只，乳酸杆菌和顺铂联合组，给予顺铂腹腔 注射 0.2ml+乳酸杆菌 2.25*106/0.2ml/只肿瘤周边进行多部位注射。荷瘤小 鼠注射等量的 PBS 作为对照，每天一次，治疗 14 天。每天检测小鼠体重 并使用游标卡尺测量肿瘤大小。停药一天后，处死取瘤。称量瘤重并使用 游标卡尺对肿瘤的径线进行测量，根据肿瘤体积计算公式：体积 V=长径 （L）·短径（W）2/2，对肿瘤体积进行计算。绘制肿瘤体积与生长时间 曲线，然后把肿瘤切开，观察肿瘤切面及内部组织。根据公式计算出抑瘤 率（IR）；10%多聚甲醛固定液固定后，以免疫组化的方法进行 TGF-β1、 IL-10 因子表达的检测。 结果： 1 体外实验：在相应刺激宫颈癌 U14 细胞 48 小时后，在 mRNA 水 平顺铂组与联合组 TGF-β1、IL-10 的表达量各自和对照组、乳酸杆菌组对 比均明显减少，具备显著性差异（P0.05）。联合组比顺铂组 TGF-β1、 IL-10 的表达量减少，对比具备显著性差异（P0.05），乳酸杆菌组与对 照组对比，减少不明显，差异无统计学意义（P0.05） 2 体内实验：各组荷瘤小鼠的生长状态：各组小鼠在荷瘤之后的前 10 天里都具有良好的生长状态，然而在第 15 天之后差异开始显现，对照组 体重有所降低，存在活动量减少以及逐渐消瘦的表现；在用药 7 天之后顺 铂组小鼠有食欲降低表现，并在用药 14 天后开始出现心动迟缓以及精神 萎靡等的现象；至于乳酸杆菌与联合组小鼠的生长状态则相对较好，没有 观察到明显体重降低情况。 3 小鼠移植瘤生长状况及抑瘤率比较：接种瘤细胞之后的前 9 天里， 各组里小鼠肿瘤生长大体保持一致；在第 10～14 天，对照组小鼠肿瘤生 长速度超过另外 3 组，其中肿瘤生长速度最慢的是联合组小鼠；第 15～ 24 天，对照组小鼠肿瘤生长速度最快，要远超过其他 3 组，而顺铂组与 联合组的小鼠出现肿瘤开始变小的情况，其中最显著的是联合组。对照组、 乳酸杆菌组、联合组以及顺铂组的肿瘤称重各自是（3.158±0.004）g、乳 酸杆菌组（2.901±0.005）g、顺铂组（2.070±0.004）g、联合组（1.576±0.003） g，对照组瘤重大于其他各用药组，各治疗组之间的瘤重两两对比都具备 显著性差异；基于抑瘤率公式能够求解到，乳酸杆菌组、联合组以及顺铂 组的抑瘤率各自是 8%，50%， 34%。其中最高的联合组，最低的是乳酸 杆菌组。 4 体内实验的免疫组化结果：在对照组、乳酸杆菌组、顺铂组以及联 合组当中，TGF-β1 平均光密度值各自是（0.466±0.003）、（0.438±0.002）、 （0