细菌脂肽pam3csk4活化人脐静脉内皮细胞toll样受体2上调mkp-1表达分子机制-molecular mechanism of bacterial lipopeptide pam 3csk 4 activating toll - like receptor 2 up-regulating mkp - 1 expression in human umbilical vein endothelial cells.docxVIP

万方数据 万方数据 中英文缩略语词表 缩略词 英文全称 中文全称 IC Inflammatory cytokines 炎症因子 IL-6 Interleukin-6 白介素 6 TNF-a Tumor necrosis factor-a 肿瘤坏死因子 a MAPK Mitogen-activated protein kinase 丝裂原活化蛋白激酶 MKP-1 Mitogen-activated protein kinase 丝裂原活化蛋白激酶 phosphatase-1 磷酸酶-1 TLR-2 Toll-Like Receptor-2 Toll 样受体 2 AngII AangiotensionII 血管紧张素 II EH Essential Hypertension 原发性高血压 TOD Target Organ Damage 靶器官损害 AS Atherosclerosis 动脉粥样硬化 NF-kB Nuclear factor kB 核转录因子 kB Pam3Csk4 Pam3-Cys-Ser-(Lys)4 细菌脂肽乙酰类似物 HUVEC Human umbilical vein endothelial cell 人脐静脉内皮细胞 RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链式反应 MCP-1 Monocyte chemoattractant protein-1 单核细胞趋化蛋白 1 COX-2 Cyclooxygenase-2 环氧化物酶-2 1 细菌脂肽 Pam3CSK4 活化人脐静脉内皮细胞 Toll 样受体 2 上调 MKP-1 表达的分子机制 摘 要 目的 Toll 样受体活化 MAPK 信号途径诱导的炎症反应参与心血管疾病的发生发 展，MKP-1 负向调节 MAPK 信号传导抑制炎症反应。本研究通过分析活化 TLR2 诱导 MKP-1 表达及其信号传导途径，阐明脂蛋白肽活化 TLR2 诱导可控炎症反 应的分子机制，为临床干预心血管疾病的发生发展提供线索和依据。 方法 利用 DMEM 和 RPMI 1640 常规方法分别培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC） 和人单核细胞（THP-1）至稳定对数生长期，进行干预实验。Pam3CSK4 的剂量 相关性分析浓度为 0、0.01、0.05、0.1、0.5、1μg/ml，时间相关性分析的剂量为 1μg/ml，处理时间为 0、1、3、6、12、24 小时。细胞干预以后 mRNA 表达水平 检测采用 RT-PCR 方法，蛋白质表达水平检测采用 western blot 方法。信号传导 抑制剂的浓度为 10 μM；信号传导分子的磷酸性蛋白水平检测采用 Western blot 方法。对结果进行灰度扫描半定量分析，所用统计学方法使用 t 检验，P 值0.05 视为具有统计学意义。 结果 1. 不同浓度 Pam3CSK4 处理 HUVCE 细胞 1 小时，RT-PCR 检测结果显示 TLR2 的 mRNA 表达水平上调，具有剂量依赖性； 2. 1μg/ml Pam3CSK4 处理 HUVEC 细胞 1-24 小时，RT-PCR 检测结果显示 TLR2 的 mRNA 表达水平上调，具有时间依赖性； 3. 不同浓度 Pam3CSK4 处理 HUVCE 细胞 1 小时，RT-PCR 检测结果显示促 炎细胞因子 TNF-α、IL-6 和 Cox-2 的 mRNA 表达水平上调，具有剂量依赖性； 4. 1μg/ml Pam3CSK4 处理 HUVEC 细胞 1-24 小时，RT-PCR 检测结果显示 2 促炎细胞因子 IL-6、TNF-α、MCP-1 和 Cox-2 的 mRNA 表达水平上调，具有时 间依赖性； 5. 不同浓度 Pam3CSK4 处理 HUVCE 细胞 1 小时，RT-PCR 检测结果显示 MKP-1 的 mRNA 表达水平上调，Western blot 检测结果显示 MKP-1 的蛋白质表 达水平的上调，两者上调均具有剂量依赖性； 6. 1μg/ml Pam3CSK4 处理 HUVEC 细胞 1-24 小时，RT-PCR 检测结果显示 MKP-1 的 mRNA 表达水平上调，Western blot 检测结果显示 MKP-1 的蛋白质表 达水平的上调，两者上调具有时间依赖性； 不同浓度 Pam3CSK4 处理 HUVCE 细胞 0.5 小时，Western blot 检测结果 显示 ERK、JNK、P38 的磷酸性蛋白表达水平上调，具有剂量依赖性； 不同浓度 Pam3CSK4 处理 HUVCE 细胞 0.5 小时，Western blot 检测结果 显示 NF-κB 抑制蛋白 IκB-α