溶液型-深圳中联生物科技开发有限公司.DOCVIP

深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation 地 址：深圳市南山区桃源街道留仙大道1183号南山云谷创新产业园综合服务楼506-508 电 话：0755传真：0755-8655 0193 网 址：  一般实验室使用，仅用于体外 细胞/组织基因组DNA提取试剂盒 （溶液型） 用于快速提取各种动植物细胞/组织基因组DNA 目录号：DP1201（50次） DP1202（100次） 目录号：DP1203（200次） 使用手册 2005年9月，第3版 深圳市中联生物科技开发有限公司 ZL Biotech Corporation 一、试剂盒组成、储存、稳定性 试剂盒组成 保存 50 次 100 次 200 次 （DP1201） （DP1202） （DP1203） 细胞核裂解液 室温 33 ml 66 ml 132 ml 蛋白沉淀液 室温 11 ml 22 ml 44 ml DNA 溶解液 室温 10 ml 20 ml 40 ml RNase A(10mg/ml) -20℃ 100 μl 200 μl 300 μl ?{试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 注意事项 1． 环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃ 水浴加热?{分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 2． 蛋白沉淀液可?\出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴?{分钟帮助重新溶解，如果不?\ 完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。 3． 避免试剂长时间?\露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。 六、疑难解答（Trouble shooting） 出现的问题 可?\的原因 建议解决方法 DNA产量低 使用了不恰当的裂解液， 处理材料不要过量。 造成裂解不完全 有的组织如肌肉，鼠尾处 尽量将材料研磨细，匀浆完全。 理困难 DNA 沉淀在洗涤的时候 异丙醇沉淀后用乙醇洗涤的过程 丢失了 中，倒弃上清的时候要格外小心， 不要把 DNA 沉淀也倒?{了。 A260/A2801.9 RNA 酶处理时间不够造 可以加大RNA 酶用量或者处理时 成 RNA 污染 间延长到 1 小时。 DNA 剪切断了 严格按照操作步骤，动作不可以 太剧烈。 A260/A280 1.6 蛋白质残留高 保证重复的裂解液用量和时间； 看看后面“未见到蛋白沉淀”问题 的解决方法，确保蛋白通过沉淀 去除。另外请参见步骤 7，防止蛋 白污染。 测定吸光值时用水稀释 使用 TE 缓冲液来稀释 DNA,保证 DNA 会降低 A260/A280 PH 值大于 8.0。 DNA 没有完全溶解 可在 65℃温育帮助重新溶解（不 要超过一小时）然后室温或者 4 ℃放置过夜，期间可以颠倒轻弹 帮助溶解。 变色的DNA 如果异丙醇沉淀后没有迅 异丙醇沉淀离心后，马上进行 70 速进行 70％乙醇漂洗的 ％乙醇清洗的步骤。 步骤，有的组织如肝脏提 取出的 DNA 可?\会变色 -1- －6－ 接前?\ 出现的问题 可?\的原因 建议解决方法 DNA长度小于20kb 样品太旧或者不正确的存 选用新鲜的样品。 放，反复冻融等，造成 DNA 降解 操作不当，造成对基因组 混匀轻柔，不可以用手剧烈振荡离心 DNA 的剪切 管，选用大口径的枪头转移或者混匀 DNA。 未见到蛋白沉淀 加入蛋白沉淀液前，裂解 冷却至室温或者冰上放置 5 分钟后 物没有冷却回室温 再加入蛋白沉淀液。 蛋白沉淀液没有和裂解混 应该连续高速涡旋振荡混匀 25 秒， 合物充分混匀 涡旋并不会剪切断 DNA。 加入蛋白沉淀液后，混合 离心前在冰上放置 5 分钟帮助沉淀。 物没有在冰上放 5 分钟 DNA沉淀难以重新 晾干 DNA 沉淀时过度了 晾干时候密切观察，不要干燥过头， 溶解水化 注意应该观察管底的 DNA 沉淀，有 时候管壁上的残留乙醇已经挥发，但 留下一些水分还没有干，只要管底 DNA 干了就可以加入 DNA 溶解 液。可在 65℃温育帮助重新溶解（不 要超过一小时）然后室温或者 4℃放 置过夜，期间可以颠倒轻弹帮助溶 解。 下游酶切切不开，或 DNA 未干燥完全，残留乙 敞开离心管口，在 65℃温育?{分钟， 者PCR反应受?}制 醇太多 让乙醇挥发。 -7- 目 录 一、试剂盒组成、储存、稳定性………………………………1 二、原理简介……………………………………………………2 三、试剂盒特点…………………………………………………2 四、注意事项……………………………………………………2 五、操作步骤……………………………………………………3 六、疑难解答…………………………………