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一、限制性核酸内切酶（限制酶）——“分子手术刀” ⒈主要来源及种类： 2.作用： 　 　 什么叫平末端？ 4.作用结果： 产生黏性末端或平末端 　 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　⑴有1~多个限制酶切点，供外源基因插入其中 　　⑵对受体细胞无害 　　⑶导入基因能在受体细胞中复制，提供大量的目的基因 　　⑷有某些标记基因，鉴定受体细胞中是否有重组DNA，便于筛选 ⒉常用运载体： 　 ⑴细菌的质粒 　 ⑵噬菌体或某些动植物病毒 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。即具有特异性 形成两种末端 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 基础上进行过 的 质粒 λ噬菌体衍生物 动植物病毒 天然质粒 人工改造 * * 转鱼抗寒基因的番茄 .抗虫转基因植物 将人的生长激素基因注射到小白鼠受精卵中，得到的“超级小鼠”。 以上几种生物各自的特定性状是什么生物技术的成果？ 基因工程 定向改造生物的新技术 基因工程的概念 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 1.1 DNA重组技术的基本工具 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ──限制性核酸内切酶 简称限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 原核生物、约4000种 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。即具有特异性 作用部位在DNA的骨架上，在梯子的扶手上。 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列， 并在G和A之间切开。 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成， 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 3、限制酶识别序列 限制酶的识别序列： 黏性末端　　　　 黏性末端 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列， 并在G和A之间切开。 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时， 被限制酶切开的DNA片断末端没有互补配对的核苷酸序列，叫黏性末端。 SmaI限制酶只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA片断的末端是平整的，这样的末端叫平末端。 被同一种限制酶切断的甲乙两种不同的DNA，能形成一个新的重组DNA分子吗? DNA连接酶将DNA片段之间的缝隙“缝合”起来，即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 DNA连接酶　　　　　　　　 作用部位在DNA骨架上，在梯子的扶手上。 互补的黏性末端的碱基通过氢键连接成 碱基对， “分子缝合针”——DNA连接酶 种类： ⑴ E·coli DNA连接酶 ⑵ T4 DNA连接酶 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？ 黏性末端　　　　 黏性末端　　　　 平末端 平末端 E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 E·coli DNA连接酶　　　　　　或T4DNA连接酶 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 将人的生长激素基因注射到小白鼠受精卵中，得到的“超级小鼠”。 　⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制，转基因生物能有预想的效果吗？ 　⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点行吗？ 　⑵霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 　 ⑷载有目的基因的载体有没有进入受体细胞，肉眼看不到，如何去鉴定它是否进入？ 质粒： 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别。 (三)基因进入受体细胞的载体