不同灸温对高脂血症大鼠血脂及肝脂酶活性影响.docVIP

不同灸温对高脂血症大鼠血脂及肝脂酶活性的影响 　　【摘要】目的 观察艾灸温度对高脂血症大鼠模型血脂四项及肝脂酶活性的影响，探讨艾灸不同调脂途径。方法 采用灌胃造模方法制备高脂血症模型。将40只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为四组，分别为正常组、模型组、38℃组、43℃组，干预四周后，眼眶取血，测定血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白含量及肝脂酶活性。结果 与模型组比较，43℃组可明显提高HL的活性，差异具有非常显著性意义（P0.05）；与38℃组比较，43℃组可明显提高HL的活性，差异具有非常显著性意义（P0.05）。结论 不同灸温对血脂及HL影响不同，HL途径是TRPV1调节血脂途径之一。 　　【关键词】高脂血症；灌胃造模；高密度脂蛋白 　　【中图分类号】R245 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2017.28..02 　　高脂血症是中老年人常见的病症，其主要危害是导致动脉粥样硬化，从而引起众多相关疾病，严重危害人类的健康。临床研究表明，灸法治疗高脂血症疗效可靠。以“温”促“通”是灸法的本质与灵魂[1]，而适宜的灸温是灸效产生的重要条件，大于43℃的艾灸刺激能产生有效调脂通脉的效应[2]。关于灸法调脂途径的研究，目前鲜见报道，与TRPV1相关性研究，尚无报道。肝脂酶（Hepatic lipase，HL）是多种脂蛋白代谢的关键酶，在脂质代谢和转运过程中起重要作用，其活性降低，可引起高脂血症，本课题根据TRPV1的激活条件，设计38℃和43℃两个温度，通过观察不同艾灸温度对高脂血症大鼠血脂及HL的影响，证实TRPV1通过介导HL途径调节血脂，进一步明确灸法调脂的生物学基础。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　（1）实验动物：由上海实验动物资源中心（西普尔-必凯）提供健康成年雄性SD大鼠（许可证号：SCXK（沪）2013-0016，清洁级），体重（180±20）g。大鼠购回后，将大鼠饲养于南京中医药大学实验动物中心，温度20℃～25℃，相对湿度60%左右的实验环境。本实验过程中对动物处置符合2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。 　　（2）主要试剂及药品：艾条为动物用艾条，生产公司为南阳汉医艾绒有限责任公司， 　　直径7 mm，动物专用清艾条。猪油（自制）；丙基硫氧嘧啶片生产厂家上海朝晖药业有限公司，批号：1506N17；Bile salts生产厂家sigma-alorich pcode公司，pcode-101691716， lot-BCBQ3263V，货号：48305-50G-F；1，2丙二醇由生产厂家成都市科龙化工试剂厂提供，批号吐温80生产厂家为成都市克隆化工试剂厂，批号为2014112601；胆固醇生产厂家为成都市科龙化工试剂厂，批号为2014071401。 　　（3）试剂和仪器：血脂四项。HL酶联免疫分析试剂盒购于上海联硕生物科技有限公司上海联硕生物科技有限公司。仪器SpectraMax M2酶标仪为美国Molecular Devices Corporation（MDC）公司产品。 　　1.2 方法 　　（1）脂肪乳剂配置方法 　　参照刘明[3]及倪鸿昌[4]的高脂模型制作方法，超市购买猪油，自行炼油去渣，冰箱8℃保存待用，取100 g猪油放于500 mL烧杯中，用电磁炉加热成液态，先后分别加入5g丙基硫氧嘧啶和100 mL吐温80，充分搅拌至完全溶解，同时准备另一个500ml烧杯，先后分别加入蒸馏水150 mL及1，2丙二醇100 mL，将其加热至60摄氏度，后再加入10 gBile salts，充分搅拌后，将此烧杯的溶液缓慢倒入第一个烧杯中，边倒边搅拌，防止因热而溢出烧杯外，之后加蒸馏水至500 mL，用玻璃棒充分搅匀后，冷却至37摄氏度后灌胃。本方法制成的脂肪乳剂含1%丙基硫氧嘧啶、20%猪油、10%胆固醇、2%胆盐。 　　（2）动物分组与模型复制 　　分组：大鼠适应性喂养1周后，称量各大鼠体重后，根据体重随机分为正常组、模型组、43℃组、38℃组，每组10只。正常组大鼠予生理盐水10 ml/kg灌胃，每日1次，其它3组予脂肪乳剂10 ml/kg灌胃，每日1次。4周后，用毛细玻璃管眼眶后静脉采血、离心取血清后检测总胆固醇和甘油三酯，经统计学分析，模型组高于正常组，且差别具有统计学意义（P0.05），说明模型复制成功，开始干预治疗，同时除正常组外，模型组、两个不同灸?氐陌?灸组继续用高脂乳剂灌胃，至取材结束。 　　（3）干预方法 　　用大鼠固定板将大鼠仰卧位固定，用剪刀将大鼠足三里及神阙穴位区0.5 cm×0.5 cm鼠毛剪除，暴露出局部皮肤。43℃组：艾条保持红火状态（每隔10 s弹灰1次