不同换液体积和血清对黄牛孤雌胚体外发育影响.docVIP

不同换液体积和血清对黄牛孤雌胚体外发育的影响 　　摘要：试验研究了牛胚胎体外培养过程中不同换液体积及血清灭活与否对黄牛孤雌胚胎体外发育潜力的影响，结果表明，以ＳＯＦａａ为基础培养液，在更换培养液体积１／２组与１／４组和３／４组之间的黄牛孤雌胚胎囊胚率有显著差异（Ｐ＜０．０５），分别为３８．８４％、２３．３９％和２１．７１％；不同处理的血清添加组的卵裂率、囊胚率和孵化囊胚率均无显著差异（Ｐ＞０．０５）。 　　关键词：牛；孤雌胚胎；体外培养 　　中图分类号：Ｓ８２８．３＋６文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）07－1413-03 　　 　　Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｃｈａｎｇｉｎｇ Ｍｅｄｉａ Ｖｏｌｕｍｅ ａｎｄ ＦＢＳ ｏｎ Ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｏｖｉｎｅ Ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｍｂｒｙｏｓ iｎ Ｖｉｔｒｏ 　　 　　ＷＵ Ｓｈｕ－ｘｉａｎ１，ＬＩ Ｌｉ２，ＳＵＮ Ｓｈｉ－ｄｕｏ１，ＱＩＡＯ Ｘｉａｎ－ｆｅｎｇ２，ＺＨＥＮＧ Ｘｉｎ－ｍｉｎ２ 　　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｙａｎｇｌｉｎｇ ７１２１００，Shaanxi，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅs／Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｅｍｂｒｙｏ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ， Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｍｅｄｉａ ｖｏｌｕｍｅ ａｎｄ ｕｎ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｔｙ ｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｒａｔｅｓ ｏｆ １／２ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｏｆ １／４ ａｎｄ ３／４ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０５） when SOFaa was used as the basic medium， they were 38.84%， 23.39%， 21.71% respectivily． Ｔｈｅ ｃｌｅａｖａｇｅ ｒａｔｅｓ ａｎｄ ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｓ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ａｎｄ ｕｎ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｇｒｏｕｐｓ （Ｐ?０．０５）． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂｏｖｉｎｅ； ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏ； ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ 　　 　　胚胎体外培养是一项相当复杂的工作，因为胚胎发育要经过早期卵裂、突破发育阻滞、桑椹胚、囊胚及孵化囊胚等阶段，影响因素较多［１］。利用孤雌激活技术筛选出最佳的卵母细胞成熟培养条件和胚胎培养条件，然后再应用于体外受精体系，就可以筛选出最佳的精子用于体外受精［２］，如此一来，将孤雌激活技术与体外受精技术相结合，使卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎培养３个主要环节可以独立进行研究，更容易对影响体外受精效率的诸多因素进行分析，发现其中的问题所在，直至筛选或摸索出最佳培养条件，从而提高体外受精效率。通过类似途径，也可以选择更合适的激活条件（包括电激活、化学激活和生物激活等）应用于孤雌生殖或核移植技术的研究。本试验主要研究了牛孤雌胚胎体外培养过程中不同换液体积和血清灭活与否对其发育潜力的影响，以期找到一种适合实验室条件稳定的牛孤雌胚胎体外培养系统，并且为牛体外受精胚的制备以及核移植试验提供参考。 　　１材料与方法 　　１．１卵丘卵母细胞复合体的收集与体外成熟培养 　　黄牛卵巢从当地屠宰场回收，牛宰杀后３０ ｍｉｎ内取出卵巢，置于含有青霉素、链霉素的３５℃左右的ＰＢＳ液保温瓶内，在４ ｈ内带回实验室，用３５～３７℃的ＰＢＳ液（不含双抗）冲洗３～４遍。用５ ｍＬ的注射器和１６号针头从卵巢的小卵泡（２～８ ｍｍ）中吸出未成熟的卵母细胞，在体视显微镜下挑选出具有完整卵丘细胞层或部分致密卵丘细胞的卵子，用洗卵液清洗３次，然后用培养液洗３次，移到事先准备好的成熟培养液小滴中进行成熟培养。每个培养小滴中