不同西兰花品种中硫代葡萄糖苷组分与含量分析.docVIP

不同西兰花品种中硫代葡萄糖苷的组分与含量分析 　　 硫代葡萄糖苷（Glucosinolates，简称硫苷）是西兰花及其他十字花科蔬菜作物中一类重要的次生代谢物，在内源黑芥子酶（Myrosinase）的水解作用下，可产生异硫氰酸盐和硫氰酸盐等一系列重要的生物活性物质[1]。许多研究表明，这类活性物质具有抵抗细菌、真菌、病毒和蚜虫等功效[2～6]，同时还具有抗氧化、延缓衰老、防癌抗癌等作用，对人类身体健康具有重要的作用，如由4-甲基硫氧丁基硫苷（Glucoraphanin，RAA）水解产生的萝卜硫素和由3-甲基吲哚基硫苷（GBC）水解产生的3-吲哚-甲醇被研究证实具有抗癌功效[7～10]。由于西兰花中含有的莱菔硫烷和异硫代氰酸盐具有很强的防癌抗癌功 　　能[11～15]，西兰花的营养保健价值受到越来越多科研人员的关注。 　　 西兰花不同品种之间硫苷含量存在明显的差异，Vallej等[14]研究发现，生长条件一致的12个西兰花品种中，最高的硫苷含量为28.3 μmoL/g（干质量，下同） ，最低的仅3.0 μmoL/g。因此，在西兰花品质育种中，硫苷组分与含量是一个值得关注的重要指标。本研究对24个综合表现优良的候选品种和5个市场上流通品种的硫苷组分和含量进行了测定与分析，以期为选育高硫苷含量的西兰花品种提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　 供试的29个西兰花品种由北京市农林科学院蔬菜研究中心提供。所有品种于2012年春季种植于露地，田间常规管理，花球长至直径12～13 cm时采收。品种名称及来源详见表1。 　　1.2 试验方法 　　 ①硫苷的提取 取新鲜西兰花的花球，分割成小块，真空冷冻干燥。称取冷冻干样0.2 g，放入15 mL塑料管中。加入内标TRO（苯甲基硫苷）0.25 mL，迅速加入100%预热的甲醇，在80℃下水浴20 min，每隔4～5 min涡旋1次。3 000 r/min下离心10 min，取上清液倒入15 mL塑料管中，放在冰盆中。继续用70%的甲醇提取2次沉淀物，同上述处理，合并上清液，即为样品液。取一次性注射器，加入玻璃棉，塞紧，放在试管上。加入DEAE胶溶液2 mL，用2 mL双蒸水洗涤，然后加入样品液2 mL。待样品液不再滴下时，加入0.02 mol/L的NaAc溶液。待不再有液体滴下，将注射器转移到另一试管上，并加入75 μL硫酸酯酶溶液，封口过夜。将过夜的注射器，用双蒸水洗涤3次，每次0.5 mL。用注射头挤压注射器，使液体尽可能转移到试管中。将试管中液体通过0.45 μm的滤膜转移到小玻璃瓶中，冷冻保存，待测。 　　 ②硫苷的分析 HPLC分析条件：Waters C18色谱柱，3.9 mm×150 mm，5 μm;检测波长229 nm;柱温25℃;进样量10 μL;流动相流速为 　　1.0 mL/min，梯度洗脱条件见表2。 　　 流动相A：1 g四甲基氯化铵（TMACl）溶于 　　2.0 L双蒸水中，混匀，抽滤。 　　 流动相B：1 g四甲基氯化铵（TMACl）溶于 　　1.6 L双蒸水中，加入400 mL色谱纯乙腈，混匀，抽滤。 　　 采用苯甲基硫苷作为内标，根据保留时间和峰面积对硫苷组分定量测定。利用内标和响应因子来计算硫苷的含量，以μmoL/g为单位。 　　2 结果与分析 　　2.1 西兰花硫代葡萄糖苷的组分与分布 　　 采用HPLC法检测，以苯甲基硫苷（Glucotropaeolin，TRO）为内标，根据保留时间及特征峰形面积对西兰花硫苷组分进行定性和定量测定。结果可以检测到8种硫苷：3-甲基硫氧烯丙基硫苷（Glucoiberin，IBE）、 2-羟基-3-丁烯基硫苷（Progoitrin，PRO）、4-甲基硫氧丁基硫苷（Glucoraphanin，RAA）、 3-丁烯基硫苷（Gluconapin，NAP）、4-羟基吲哚基-3-甲基硫苷（4-Hydroxyglucobrassicin，4OH）、3-甲基吲哚基硫苷（Glucobrassicin，GBC）、4-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷（4-Methoxyglucobrassicin，4ME）、 1-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷（Neoglucobrassicin，NEO）。根据侧链R基团的不同，前4种属于脂肪族硫代葡萄糖苷，后4种属于吲哚族硫代葡萄糖苷。29个西兰花品种所含8种硫苷的含量见表3。 　　 表3表明，29个西兰花品种中8种硫苷的总含量均值为11.27 μmol/g，其中吲哚族硫苷含量与脂肪族硫苷相比，总体略高，各占53.06%和46.94%。在各组分中，RAA含量最高，占总硫苷含量的34.78%;其次是GBC，占25.02%;第3是NEO