不同试验周期下Cu对玉米种子发芽和根伸长影响.docVIP

不同试验周期下Cu对玉米种子发芽和根伸长的影响 　　摘要：为探究植物种子是否会因为受试物暴露时间不同而得到不同的发芽抑制率、根长下降率及EC50，进而影响受试物生态毒理学危害性级别的判定，选用玉米为试验种子，CuSO4?5H2O为受试物，设置了6个受试物浓度组，开展了周期为2～7 d的试验。结果表明：在中低暴露浓度下，不同周期对玉米种子发芽率影响较大，发芽抑制率的EC50最值相差高达352.9 mg/L，也使根长出现显著性差异，但根长下降率及其EC50无明显差异。得出了试验周期不同，不影?CuSO4?5H2O生态毒理学危害性分级结果的结论。 　　关键词：试验周期；发芽抑制率；根长下降率；半最大效应浓度 　　中图分类号： 　　文献标识码：A文章编号2017 　　1引言 　　由于当代环境污染问题日益严重，国家环保部门对化学品管理越来越严格。尤其是新化学物质方面，在其登记注册投入生产前需要进行环境风险评估，根据其产量进行分类管理，减少化学物质进入环境后的潜在风险。 　　高等植物是生态系统基本的组成部分。目前有2种陆生植物生态毒理试验用于化学品测试[1]，一种是种子发芽和根伸长的毒性试验，另一种是陆生植物生长活力试验。前者常用于测定受试物对陆生植物种子发芽和根部伸长的抑制作用，评价受试物对植物胚胎发育的影响。种子萌发是植物生长周期中最为关键的阶段，也是对周围环境最为敏感的时期[2，3]。目前，种子发芽和根伸长毒性试验是我国新化学物质陆生植物生态毒理测试中对受试物进行环境风险评估的重要技术之一[4]，明确规定进行三级或以上申报时，应提交该测试数据，除非受试物满足如土壤吸附率过低等豁免条件[5]。 　　随着中国加入了世界贸易组织（World Trade Organization， WTO），在与经济合作与发展组织（Organization for Economic Co-operation and Development， OECD）成员国进行化学品国际贸易过程中所提交的测试数据必须为其准则规定的方法。准则对种子发芽和根伸长毒性试验进行了较为详细的介绍，但对植物种子的试验周期却没有明确规定，仅说明对照组种子发芽率在65%以上且根伸长长度达至少20 mm时，即可结束试验[6]。仅凭试验人员的经验来决定试验周期，主观性强，较为随意。植物种子是否会因为受试物暴露时间不同而出现不同的EC50，差异有多大，是否会影响受试物生态毒理学危害性分级，目前尚未见相关报道。因此，研究不同试验周期下植物种子对受试物的响应情况，具有重要的实用价值。 　　试验以石英砂为基质，选用玉米为受试植物种子，CuSO4?5H2O为受试物。探究Cu在不同试验周期中对受试种子发芽和根伸长毒性的影响，为测试机构在工作实践中优化试验条件提供理论依据。 　　2材料与方法 　　2.1试验材料 　　2.1.1受试物 　　CuSO4?5H2O（≥99%），分析纯，购于广州化学试剂厂。 　　2.1.2试验种子及处理 　　选用玉米（Zea mays）为受试种子。玉米为《化学品测试方法》推荐的受试植物之一，购于广东省农科院蔬菜研究所。 　　试验开始时将玉米种子放在去离子水中漂洗和浸泡1 h，未进行消毒处理。试验时选取大小、饱满度一致的种子，弃掉破损的种子。 　　2.1.3试验基质 　　石英砂，粒径为40～100 μm。 　　2.1.4仪器 　　人工气候箱、三按键电子数显卡尺、手提式pH测试仪、DSR系列温湿度记录仪。 　　2.2试验条件 　　25±1 ℃，黑暗。 　　2.3试验方法 　　2.3.1试验操作 　　设置1个空白对照组和6个受试物处理组，每个平行10粒种子。用CuSO4?5H2O作为基质中Cu的来源，浓度以Cu计。受试物浓度系列分别为0、10.0、50.0、100、500、800、1000 mg/L。 　　试验前测定石英砂的pH值[7]及其饱和含水量[8]。按石英砂饱和含水量的60%将受试物溶液添加至石英砂中（空白对照组以去离子水替代），充分混匀后，分装至培养皿中，再将玉米种子置于石英砂表面，轻压入内，覆盖少量石英砂，并保持种子胚根末端和生长方向成一直线。盖好培养皿，并用保鲜膜密封。将培养皿放入人工气候箱中，呈极小的角度便于根的直线生长。 　　分别在第2、3、4、5、6、7 d从每个试验组中随机取出2个平行，计算发芽率，并使用电子数显卡尺测量各种子根长，根长的测定从位于胚轴和根的转换点到根尖末端。当种子初生根的长度达5 mm时，视为发芽。 　　2.3.2数据统计 　　应用Microsoft Office Excel 2003统计种子发芽率、平均根长、发芽抑制率以及根长下降率。分别使用SPS