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不同低温胁迫下葡萄枝条抗寒生理指标的分析 　　摘要：为了探究低温胁迫对葡萄（Vitis L.）枝条相关生理指标的影响，试验以抗寒山葡萄左优红（V. amurensis Rupr. cv. Zuoyouhong）与不抗寒欧洲葡萄赤霞珠（V. vinifera L.cv. Cabernet Sauvignon）枝条为试材，比较了不同温度（25、5、-5、-15 ℃）对葡萄枝条内超氧化物歧化酶、过氧化物酶与谷胱甘肽过氧化物酶活性以及总酚、木质素与纤维素含量的影响。结果表明，随着处理温度的降低，枝条中的超氧化物歧化酶、过氧化物酶活性均呈现先上升后下降的变化趋势；总酚含量呈逐步减少的趋势，且2种葡萄之间存在差异；纤维素含量呈先上升后下降的趋势，与超氧化物歧化酶变化规律基本一致，木质素含量变化无明显规律，谷胱甘肽过氧化物酶经过低温处理后酶活性得到明显提高。 　　关键词：葡萄（Vitis L.）；枝条；温度；抗寒力；生理指标 　　中图分类号：S663.1；Q944.55；Q948.112+.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）18-4509-05 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.18.030 　　葡萄（Vitis L.）是全球重要的果树种类之一，主要分布于北纬30°～50°区间，被广泛用于酿酒、制汁、制干与鲜食。中国的葡萄产区主要集中在北方地区，低温冷害是北方葡萄生产中存在的主要问题，发生冻害的树体需要一年或者多年才能恢复，严重的甚至导致树体死亡，造成产量和品质的波动，致使生产者蒙受经济损失[1]。宁夏回族自治区葡萄产区作为全国最大的酿酒葡萄产地，其酿酒葡萄面积高达3万hm2。该地区昼夜温差大，光照充足，葡萄产量高、品质好，在中国葡萄产地中具有独特的优势；但是当地的严寒气候是制约鲜食葡萄及酿酒葡萄大规模生产的重要限制因子。在葡萄的生长过程中，防止葡萄在低温气候中发生冻害是葡萄种植中最关键的一步。目前，宁夏葡萄产区越冬防寒的主要措施是采用埋土来防寒，尽管这样做取得了一定的效果，但是冬季埋土防寒、春季出土上架造成了劳动力与财力的大量消耗，不仅增加了果农的生产成本，并且在一定程度上破坏了葡萄园的生态环境。 　　因此，有必要对葡萄自身的抗寒性能进行系统深入研究。国内外有关葡萄抗寒性的研究已有很多报道，在低温胁迫下，葡萄体内的渗透调节物质、保护酶活性、丙二醛、脯氨酸等生理生化产物均会产生变化，并被作为葡萄抗寒性鉴定的筛选指标。试验以不抗寒的欧洲酿酒葡萄品种赤霞珠（V. vinifera L.cv. Cabernet Sauvignon）与抗寒山葡萄品种左优红（V. amurensis Rupr. cv. Zuoyouhong）为研究对象，通过模拟不同低温胁迫条件，测定一年生葡萄枝条的有关抗寒生理指标，包括总酚、木质素、纤维素含量以及超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、过氧化物酶（Peroxidase，POD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）的活性，旨在比较分析低温胁迫下葡萄枝条相关抗寒生理指标的变化规律，了解这些调节物质与抗寒性的关系，从而探索它们与低温胁迫、抗寒能力的相关性，并对葡萄抗寒性鉴定的生理生化指标进行筛选，同时为培养葡萄抗寒新品种提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 植物材料 试验在宁夏大学葡萄与葡萄酒工程研究中心玉泉营实验基地进行采样，该地位于北纬38°12′，东经105°99′；参试的赤霞珠和左优红植株都为定植于园内的五年生成年树。在2013年9月3日进行采样，从生长势一致的植株上收集一年生枝条，从基部第六节开始，每株剪取长40～50 cm、粗0.9～1.1 cm的枝条若干，剪取后用自来水、蒸馏水先后冲洗数次，用洁净的纱布擦干，两端封蜡，塑封后置于冰盒带回实验室。 　　1.1.2 试剂 试剂主要有福林肖卡溶液、饱和碳酸钠、磷酸缓冲液、重铬酸钾、愈创木酚、甲基氨酸、氮蓝四唑、核黄素、乙二胺四乙酸、乙醇、酸性茚三酮、冰醋酸、浓硫酸、硝酸、盐酸、双氧水、偏磷酸、丙酮、乙醚、硫代硫酸钠、碘化钾、磺基水杨酸等。 　　1.2 处理 　　在宁夏大学葡萄与葡萄酒工程研究中心实验室将样枝用蒸馏水冲洗干净，均匀分为4份，其中3份分别在-15、-5、5 ℃的冰箱中进行冷冻（藏）处理。降温至设定温度后持续24 h，之后将-5、-15 ℃处理的样品统一放置在5 ℃环境中解冻4 h；另外1 份作为对照，在室温（25 ℃）下放置24 h；然后选取不同处理的枝条进行相关指标测定。 　　1.3 抗寒生理指标测定 　　将参试样品分为两部分，其中一部分枝条放