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红豆杉细胞两相培养生产紫杉醇的研究 第10卷第1期 2(X)O年2月 生物技术 BⅡ)CHNOIDCY Vo1.10.NoI Feb,2000 :7]田静.邹桂平.方勤草鱼出血病病毒基因组的cDNA台 成,克隆及部分序刊仆析.中国病毒学.1,1487—92 8Jcl1Ilw.Espa~J.Hud~nGR.口fCloning thed~ble—stranded1Ae【Jf∞:~e1]Ceofd cl~ed鸵.6,elle.B10chm1s.1982.79:7644—7648 L9JSambrookJIFritschEF.ManiatisTMdecHiarcl~ling.A laboratorymu,2nd~lUS^.NY:CddSpringH~bor— l9静.22—23. 【IO]ShatkmAJ..F~iehiY,laFiandiaAJalIni~fion ofm刚synthesisand5一temfirudrood击cationof唧jnB transcriptsIn:RicllHldW.fedsI~ble—stranded I^virusesElsevierBllm~diea1.1983.43—54 IIJ【R,GillisEandFiefsW.曲zcaddirion Po]y{A)the3一end0fRNAusing0PhMs2 AadEurJ.BⅧ1976.62:401— 4lI】 【i2:Wu】L..Songll_,KamppiahN..etⅡfKineticinduction ofoatslz~t州vimtsim,erlasemRCAgravisfirndati~and E斌eDNAdccdngby山epvnemsechain啷c【i【ln._皿t M0lBioI.1993.21.175 Arapid,simpleandveryefficientmethodfor synthesisandcloningofcDNA TIANJing.FANG嘶 (WuhanInstituteof~o/ogy,Acad~5/rdca.,China) Abstract:Arapid,simpleandveryefficientmethodforsynthesisandcloningofeDNAisdescribed,by takingfishreo~4msdsRNAa8template.Thetechniqueinclude:Underthefixedquantityoftemplate.the firststrandofeDNAissynthesesedbyusingrandomhexamersasprimer.ThetwoStlandsofeDNAare armealedandcheckedon1%舀ageldirecdy.Theds—eDNAisblunt—endligatedintothen一 102.0vectorwhichhaspositiveselectivemink,thenclonedbyelectropomtiontransformationtI1high efficiency. KWords:double—strandedRNA;randomhexmnem;synthesisofeDNA;yefficientcloning @,.姆特～删m埘m瑚 红豆杉细胞两相培养生产紫杉醇的研究 (华中理工大学生命科学与技术学院生物技术研究所,湖北武汉,4~074) * S7qb#~o.4 amp;25j 摘要:研究了两相培养系统中红豆杉细胞的生长与代谢规律,经加天培养,细胞生物量为 17.85g/ : L(~) ; 答翟1.~细g啦/Lo捆譬鹤美键词:自盈堑;坐璺;旦!生.细目皂生狗差,{捆譬储斋 收穗日期:1999一o8—26 *国家科委八五,九五重点攻关项目【85.08—05—02.96cO2 D3~II) 在前期工作基础上,成功实现了红豆杉 细胞的两相培养,并对两相培养系统中细胞 的生长代谢规律进行了细致研究,为红豆杉 的连续培养奠定了基础. 2000年2月红豆杉细胞两相培养生产紫杉醇的研究 1材料与方法 1.1细胞悬浮培养:红豆杉细胞株来源于本 实验室筛选的无性系,以本室62培养基培 养细胞.实验中以250mi三角烧瓶分装 1COral液体培养基,接种量1o异(鲜重)细胞每 瓶,另加5%(v/v)的松油醇作为第二相,5% (v/v)二甲基亚砜作为产物释放剂,于25℃, 120r/rain条件下黑暗培养. 1.2培养过程中实验参数的测定 a:细胞鲜重与干重的测定:将培养液抽 干后称鲜重(FW),然后冷冻干燥24h后,称 干重(DW),并用于紫杉醇含量测定. b:残糖,磷酸根,硝酸根及氨根离子的测 定分别采用苯酚.浓