试管中国兰培养基.PPT

医学微生物学 主要内容： 1、上次实验结果观察 2、培养基的制备 3、R质粒（耐药性）接合传递试验 4、药敏试验 5、高温对细菌的杀灭作用 6、高压灭菌器的使用 7、细菌接种培养法 培养基的制备 培养基的分类 1、按用途分为：基础培养基、特殊培养基、选择培养基、鉴别培养基 2、按坚度分为：液体培养基、半固体培养基、固体培养基 主要材料： 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂、（氢氧化钠、酚红指示剂、标准比色管） 液体培养基制备方法： 1、将牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g加入1000ml水中，用玻棒搅拌使其溶解，必要时加热促其溶解。 2、用氢氧化钠调整酸碱度至pH7.2 3、调整后，煮沸10分钟，补足失水，以滤纸过滤使其澄清。 4、分装后，高压蒸气103.4kPa灭菌20分钟 固体培养基制备方法： 1、在100ml牛肉汤培养基内加入琼脂2g（即2%琼脂） 2、高压蒸气103.4kPa灭菌15分钟，趁热将试管斜置，冷凝后即成普通斜面培养基 3、或待肉汤琼脂冷至50～600C时，以无菌技术倾入灭菌的空培养皿内，冷凝后即为普通琼脂平板 R质粒接合传递试验 （细菌的耐药性变异） 什么是质粒？ 什么是接合？ 目的要求： 了解R质粒在细菌变异中的作用 材料： 1、耐链霉素、氯霉素、四环素及磺胺药物的福氏痢疾杆菌（供体菌） 2、对上述药物敏感但对利福平耐药的大肠杆菌（受体菌） 3、含利福平和氯霉素的中国兰平板 4、肉汤培养基、灭菌吸管、试管 中国兰培养基： 成份： PH7.4的2%琼脂基础培养基 100ml 乳糖 1g 1%中国兰溶液 0.5ml 1%蔷薇色酸酒精溶液 1ml 蔷薇色酸对一般革兰氏阳性菌有抑制作用，所以革兰氏阳性菌在此培养基上不能生长。 大肠杆菌因能分解乳糖产酸，故菌落呈兰色且有深兰色的核心。伤寒杆菌、痢疾杆菌等致病菌不能分解乳糖，故菌落透明无色。 药敏试验 目的要求: 1、了解抗生素敏感试验的操作方法 2、初步作为抗生素敏感试验结果的 判断 3、了解常用抗生素的抗菌谱 纸片法 材料： 1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾 杆菌、绿脓杆菌 2、培养基：普通琼脂平板 3、抗生素滤纸片：每片含药量：青霉 素1单位，其它抗生素为10微克 高温对细菌杀灭作用 消毒 灭菌 抑菌 防腐 目的要求： 认识高温（煮沸法）对细菌繁殖体和芽胞的作用 材料： 1、菌种：枯草杆菌（有芽胞） 大肠杆菌 （无芽胞） 2、肉汤培养基、水浴锅 细菌培养法 单号 双号 固体 ：平板 金葡、大肠杆菌混合液 斜面 金葡菌 绿脓菌 半固体：FeSO4 伤寒菌 痢疾菌 液体：糖发酵管 伤寒菌 痢疾菌 蛋白胨水 伤寒菌 痢疾菌 作业： 四、五 37℃ 24h 枯草杆菌 枯草杆菌 大肠杆菌 大肠杆菌 100℃ 5min 100℃ 5min 菌膜 澄清 浑浊 普通条件培养下细菌生长状况 枯草杆菌 大肠杆菌 高温灭菌后细菌生长状况 枯草杆菌 大肠杆菌 高压蒸气灭菌法 １、原理 ２、重要参数 ３、适用范围 ４、意义 ５、高压蒸气灭菌器结构 ６、使用方法及注意事项 锅盖 内锅 外锅 * * 实验二 细菌的生理学 什么是培养基？ 培养基是用人工将多种必要的营养物质按微生物生长繁殖的需要而合成的一种混合营养料，用以分离和培养微生物。 液体培养基 固体培养基 （平板） 固体培养基 （血平板） 固体斜面培养基 复习思考： H+ OH- 中国兰 兰色 无色 蔷薇色酸 黄色 红色 PH 7.4 呈淡红微带紫色 H+ OH- 中国兰 兰色 无色 蔷薇色酸 黄色 红色 普通 利福平 氯霉素 含药 中国兰 中国兰 痢疾 无色 敏感 耐药 不生长 杆菌 半透明