组织培养技术管理3.ppt

组织培养技术 ;一、细胞转化技术; ;; ; ; ; ; ;;二、细胞融合技术;;;;单抗制备 细胞融合 细胞增殖 细胞克隆 ; ;三、培养细胞的脱核法;;四、细胞同步化法;;;细胞培养中的基因转导技术;一、基因转导技术的原理;;基因细胞内转导技术方法; ;; ;二、基因转导的常用方法;;; ;;小细胞融合染色体导入示意图; ; ; ; ;; ;细胞显微注射法; ;三、转基因技术;;雄鼠;四、靶基因技术;; ;五、基因治疗;;; ;;培养细胞的生物学检测;一、培养细胞的形态学检测;固定细胞的形态学检测 光学显微镜检测 细胞固定 一般染色法 Giemsa染色 苏木精-伊红（HE）染色法 Feulgen染色法 丫啶橙染色荧光观察法; 电子显微镜;活细胞直接观察方法 相差观察和摄影 缩时显微摄电影和闭路电视纪录，记录细胞连续动态变化过程;二、培养细胞的细胞成分检测; ; ;YIDD株1d;YMDD株3d;;三、培养细胞的生物学性状检测; ;;; ; ;; ;; ;（四）细 胞 凋 亡;死亡是生命的普遍现象，但细胞死亡并非与机体死亡同步。正常的组织中也发生细胞死亡，它是维持组织机能和形态所必需的。 ;定义 ;1、原 理; ;;细胞坏死 ;细胞凋亡与坏死的区别;细胞凋亡与坏死的区别;apoptosis;细胞凋亡的生理意义;2、细胞凋亡 形态学检测法; ;;胸腺细胞;胸腺细胞;A;3、凋亡细胞的 生物化学检测法;凋亡细胞的生物化学特征 ;细胞凋亡时DNA呈现180bp片段;4、诱导凋亡细胞的 免疫化学检测;;（1）方法;;;（2）结果;（五）流式细胞分选术;Flowcytometry 流式细胞仪; ; ;流式细胞仪工作原理图;CD4和CD8 T 细胞分析;荧光探测装置;流式细胞仪数据分析（一）;流式细胞仪数据分析（二）;1、方 法;荧光染色; ;（六）细胞酶活性测定; ;1、 酸性磷酸酶;2、琥珀酸脱氢酶;(七）DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法;;培养细胞的遗传学检测;一、培养细胞染色体显示法;原理 提高细胞分裂相数方法 刺激细胞增殖（PHA） 阻抑中期分裂（秋水仙素法、低温处理） 促染色体分散措施 低渗处理：使细胞体积胀大，染色体松散 醋酸固定：醋酸有膨胀固定作用，和醇类混合固定有利于染色体松散效应。; ;人末梢血微量全血培养染色体显示法 末梢血淋巴细胞是已发生分化、处于功能态和无分裂活???的细胞。 在PHA的诱导下，T淋巴细胞可重新进入增殖态发生细胞分裂。 每次从被检者静脉或指尖、耳垂等处仅采少量血，即可够做数个样品的培养，大大简化了观察人染色体的方法。 ; ;二、染色体结构显示和检测; ; ; ;染色体臂上已发生断裂的特定部位 ; ;; ;三、染色体基因定位;; ; ; ;培养细胞的基因及其产物的检测;一、DNA（基因）检测;检测方法;; ; ;二、培养细胞中RNA的检测;;;细胞microRNA检测;;主要检测内容; MicroRNA表达谱;;MicroRNA表达检测;检测步骤;MicroRNA表达?;???? MicroRNA功能学实验 ;;三、培养细胞的相关蛋白质检测;; ;;;组化法;THANK A LOT !