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中药祛斑合剂对衰老模型小鼠皮肤相关指标的影响 　　摘要：目的观察中药祛斑合剂对D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮肤相关指标的影响。方法健康昆明种小鼠60只，随机分为正常对照组、衰老模型组、祛斑合剂高、中、低剂量（12.0.6.0，3.0 mL/kg）组和维生素E组（阳性对照组），每组10只。衰老模型组、制剂高、中、低剂量组和维生素E组，颈背部皮下注射5%D-半乳糖连续6w，建立小鼠亚急性衰老模型。给药组同时灌胃给予祛斑合剂和维生素E，正常对照组和衰老模型组给予等体积纯净水。检测皮肤组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）、脂褐质（Lpf）、羟脯氨酸（Hyp）含量及皮肤水分含量。结果祛斑合剂可提高皮肤SOD活力，提高Hyp含量及皮肤水分含量；降低皮肤MDA及Lpf含量。结论祛斑合剂具有抗D-半乳糖所致小鼠皮肤衰老的作用。 　　关键词：中药祛斑合剂；抗皮肤衰老；抗氧化；动物实验 　　中图分类号：R85.5文献标志码：B文章编号：1007-2349（2018）01-0075-02 　　皮肤是人体最大的器官，是美容的主要对象。皮肤老化常表现为皮肤干燥、粗糙、脱屑、色斑、松弛、皱纹、皮肤萎缩、血管突显、敏感性和脆性增加等[1]。它不仅影响美观，还与脂溢性角化、基底细胞癌等多种皮肤病有着病因学的联系。因此预防和延缓皮肤衰老一直是近些年医学科学研究的热点之一。本院皮肤科已故专家（国家级名老中医学术经验继承指导老师、云南省名老中医）刘复兴教授经验方中药祛斑合剂（院内制剂），多年来临床应用于防治黄褐斑、皮肤老化，取得较好疗效。笔者采用中药祛斑合剂对抗小鼠皮肤衰老做了实验研究，现将结果报道如下。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物及材料清洁级健康昆明种小鼠，体重18-22 g，雌雄各半，购自昆明医科大学实验动物中心，中药祛斑合剂由云南省中医医院制剂中心提供；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、脂褐质Lpf试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、羟脯氨酸（Hyp）试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；D-半乳糖（上海?{季科技发展有限公司）；维生素E（浙江医药有限公司）；其余试剂为市售分析纯。 751光栅分光光度计，RF.540荧光分光光度计，MEGAFUGE 1.0R高速台式离心机。 　　1.2实验方法[2-3] 　　1.2.1动物模型制备、分组、给药及取材选择清洁级健康昆明种小鼠60只，体重（20±2）g，雌雄不限，随机分成6组，每组10只，雌雄分笼饲养，饲养温度为18～22℃，相对湿度为45%～55%，规律光照，自由饮食，适应性饲养1 W后开始实验。随机分为正常对照组、衰老模型组、中药祛斑合剂高、中、低剂量组和维生素E组（阳性对照组），每组10只，分笼饲养。衰老模型组、制剂高、中、低剂量组和维生素E组，每日经颈背部皮下注射5%D-半乳糖25 mL/kg，建立小鼠亚急性衰老模型[4]，正常对照组每日经颈背部皮下注射等体积的生理盐水。同时祛斑合剂各组每日灌胃给予祛斑合剂（高12.0、中6.0、低3.0 mL/kg）；维生素E组每日灌胃给予维生素E 500 mg/kg；正常对照组和衰老模型组每日灌胃给予等体积纯净水，各组均连续给药6 W。第7周处死动物前1 d，所有动物两肩胛至两髂骨之间背部皮肤以10%Na2S溶液对称脱毛（面积为3 cm×3 cm）；第2天处死动物，取背部正中皮肤0.5 cm×0.5 cm大小，留取1 g待测含水量用，其余迅速冰冻保存，拟作皮肤组织匀浆及测定皮肤羟脯氨酸等指标之用，各指标所选取材部位相同。实验过程中，每5 d各鼠称重记录1次，每日观察小鼠的皮毛色泽、饮食、饮水、大小便、精神活动情况等。 　　1.2.210%皮肤匀浆的制备取脱毛皮肤组织0.5 g，经预冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和其他结缔组织，滤纸拭干，称重，量筒量取该组织块9倍质量预冷生理盐水，用匀浆机制成10%组织匀浆（在低温环境中使组织细胞完全破碎，显微镜下观察内容物全部游离在液相中）。 　　1.2.3各项指标的测定皮肤匀浆中Lpf，SOD，MDA.Hyp含量或活力，均根据测试盒所附方法、步骤测定。 　　1.2.4皮肤中水分含量的测定采用烘干法取1 g皮肤，精密称取湿重后置烘箱中，于80℃烘干12 h，称其干重，计算皮肤含水量。 　　2结果 　　中药祛斑合剂能提高衰老模型小鼠皮肤超氧化物歧化酶（SOD）活力及羟脯氨酸（Hyp）含量和皮肤含水量；降低衰老模型小鼠皮肤组织中脂褐质（Lpf）、丙二醛（MDA）含量，且呈现剂量依赖性。提示本品具有延缓皮肤衰老作用（表1）。 　　3讨论 　　皮肤的衰老是一个复杂的生物学过程，对此有多种解释，如自由基学说、交联学说、遗传学说、免疫学说等，其中自由基学说比较被认同。机体在新陈代谢过程中，不断产