形态学检查.PPTVIP

A.Smear Preparation Procedure （二）方法与步骤 A．制片： ⑴ 涂片：取清洁玻片一张，在玻片的中央滴一小滴生理盐水（滴加生理盐水不宜过多）。用无菌牙签挑取牙垢少许，与玻片上的水滴混匀，涂布成一厘米大小的均匀薄膜。 ⑵ 干燥：将涂片放室温中自然干燥，切勿紧靠火焰烘烤，以免标本烤焦，损害菌体结构。 ⑶ 固定：持玻片一端，标本面向上，迅速通过火焰三次（约2～3秒），以玻片温度达到皮肤能耐受的温度为宜。固定的目的是杀死细菌，使其固定于玻片上，并能增强细菌对染料的通透性。 Smear preparation Heat fixing Overview of Smear Preparation Procedure Smear: size of a dime to form a thin film Dry : air dry Fix: through the warm air above the flame two or three times 2．革兰染色： ⑴ 初染：将已固定的涂片标本，加结晶紫染液于涂面上染色1 min(10s)，然后水洗。 ⑵ 媒染：加革兰氏碘液媒染1 min(10s) ，水洗。 ⑶ 脱色：滴加95%酒精，频频摇动载玻片，斜持载玻片，使脱下的染液流下，再次滴加酒精脱色，直至流下酒精无色或稍呈淡紫色为止m(10-20s) ，水洗。 ⑷ 复染：用稀释复红或沙黄染液复染30 s至1 min (10s) ，水洗，自然干燥或吸水纸印干。 * Setting up Slides on Staining Rack * Crystal violet stain (1’) * Rinsing off slides Iodine solution stain(1’) Rinsing Slides * Don’t Splash Adjacent Slides Decolorisation Step(≤33’’) Rinsing Slides Counterstain with Safranin(30’’) Rinsing Slides Drying the Stained Slides Results 注意事项 1．玻片一定要清洁无油。 2．加生理盐水切莫贪多以免难于干燥，涂片要均匀且薄。 3．固定标本时切勿过热，以免菌体变形。 4．要掌握好染色时间，尤其是酒精脱色的时间，不宜过长或过短，以脱色至涂片为灰色为宜。 5．水洗时要以细流水徐缓冲洗，否则会将玻片上的标本冲掉。 （三）革兰染色的意义(significance of Gram staining) 将细菌区分为革兰阳性、革兰阴性两大类，有助于细菌的鉴别诊断。 选择药物: 革兰阳性菌与革兰阴性菌对各种抗生素的敏感性不同。 研究细菌的致病性：一般革兰阳性菌外毒素致病，革兰阴性菌内（外）毒素致病。 * 油镜使用注意事项 寻找视野：在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。 增大光照强度：将聚光器上升到最高位置，光圈开到最大 转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头： 转动转换器，在需观察部位的玻片上滴加1-2滴香柏油，眼睛从镜筒侧面看，旋转粗调节器，使镜筒下降浸入镜油并贴近标本，但勿触及玻片。 然后将眼睛移至目镜，一面观察，一面把粗调节器作些微转动，待看到模糊物象时，再旋转细调节器至物象清晰为止。 油镜的保护方法 （1）镜检完毕后，把镜筒升高，用擦镜纸把油镜头上的镜油擦净，如油已干，或透镜模糊不清，可以用擦镜纸沾少量二甲苯擦净，然后再用干的擦镜纸把二甲苯擦去。 （2）旋转回转板，使物镜头呈八字形，降低镜筒，把集光器稍微下降，然后把显微镜装入镜箱，锁紧箱门，以防跌出及尘埃侵入。 思考题: 一、据实验体会，你认为制备染色标本时应注意哪些事项？为什么制片要完全干燥后，才能用油镜观察？油镜的使用和保护方法注意那些事项？ 二、细菌的形态检查法的基本程序是什么？细菌经革兰染色后，为什么有的呈紫色，有的呈红色？能否根据细菌在显微镜下的形态来鉴别细菌。 三、书写牙垢涂片革兰氏染色的实验报告并记录细菌的基本形态与特殊结构。 * * * * * * * * * 病原学诊断方法: 常见细菌形态学检查方法 细菌感染的检测 实验一 病原学诊断方法、常见细菌形态学检查方法 一、讨论： 1.微生物学实验室规则、实验室生物安全 2.细菌感染的检查方法、复习细菌的基本结构、特殊构造 3.油镜的使用 二、示教： 1.球菌、杆菌、弧菌、芽孢、荚膜 2.电镜观察细菌菌毛 三、操作： 牙垢的革兰氏染色法（4-5人/组） （掌握：原理、方法步骤