葡糖-磷酸脱氢酶缺乏症的遗传.PPT

汇报人：宋静 其他成员：曾令峰 娄子健 陈灵芝 路武平 周成鹏 案例 进一步明确诊断方案 　 即：当编码调控G6PD的基因突变时，会发生G6PD 的缺乏！ 因此：可以采用单链构象多态性分析技术 基因芯片 等技术，来检测调控G6PD的基因。 患者体型瘦小与蚕豆病 这是一种遗传性缺陷性疾病,平时无任何不适和症状,根本没有体型上的异常改变.但是,一旦遇到偶然的机会,如吃蚕豆或服用某些氧化性药物,便引起急性溶血现象. 所以二者没有关系！ * * 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。一天前使用新鲜蚕豆后，今日出现恶心，呕吐，排尿呈酱油色，面色苍白。据家长反映，患者姐姐也曾出现过类似的情况 案例 体格检查：体温38，脉搏150次/分，呼吸40 血压80/60mmHg。。呼吸急促神清，萎靡面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心肺未及异常。肝脾未触及。双肾区无叩击痛，神经检查未及异常 血清胆红素升高，黄疸 案例 实验室检查：红细胞1.98*10 12次方血红蛋白53g/L血清总胆红素85.5umol/L结合胆红素13.7未结合71.8尿蛋白++潜血+尿胆红素-尿胆素原+尿液镜下未见红细胞 初步诊断 高铁血红蛋白还原法测定红细胞G-6PD 的活性 红细胞内6-磷酸葡萄糖脱氢酸酶（G-6PD）在磷酸戊糖旁路糖代谢中能使6-磷酸葡萄糖变为6-磷酸葡萄糖酸，同时使（NADP+变成NADPH，NADPH可使氧化型谷胱甘肽（GSSG）变成还原型谷胱甘肽（GSH）并使高铁血红蛋白（HbFe+++）还原成低铁血红蛋白（HbFe++）。本试验用亚硝酸钠使HbFe++氧化为HbFe+++（暗棕色）。如果红细胞内G-6PD含量正常，则有足量的NADPH产生，它作为高铁血红蛋白还原酶的辅酶，在美蓝（递氢体）参与下使HbFe+++很快还原成HbFe++。GSSG还原成GSH：如果红细胞缺乏G-6PD则NADPH生成减少，HbFe+++还原成HbFe++也减少，本试验即以高铁血红蛋白还原率来反映NADPH生成状况而间接测知G-6PD是否缺乏。 　　 0.18mol/L亚硝酸钠-0.28mol/L葡萄糖溶液，0.4mmol/L亚甲基蓝溶液，生理盐水，静脉血（空腹抽取加入抗凝剂），离心机，试管，水浴箱，紫外分光度计 一、将抗凝血以1000r/min15离心沉淀15min，取出，调整血细胞与血浆比例1:1再混匀 二、将 0.18mol/L亚硝酸钠-0.28mol/L葡萄糖溶液与0.4mmol/L亚甲基蓝溶液等量混合，形成混合试剂 三、取三支试管，标明A B C按下顺序进行操作 - 0.01 - 0. 18 mol/ L 亚硝酸钠- 0. 28 mol/ L 　葡萄糖溶液/ mL 10.00 10.00 10.00 蒸馏水 来回摇晃15-20次，置37度水浴箱中静置3h 0.1 0.1 0.1 经调整的全血/mL 0.01 - - 生理盐水/mL - - 0.01 混合试剂/mL B C A 四、混匀以B管为空白管在波长635nm处测定A及C的吸光度(OD)。 五、计算 高铁血红蛋白还原率( M) 按如下公式计算。 M( %)=( 1- (A O D- B O D/C O D- B O D) ) × 1 0 0 % 1， MHb%在31~74%之间（为杂合子）即为G-6PD活性缺乏。 2，MHb% ≦30%（纯合子），该酶严重缺陷。 高铁血红蛋白(Met Hb)还原试验杂合子的检出率高于定量法,但有假阳性率高的缺点。 美蓝及亚硝酸钠易被氧化，注意试剂的保存 从生化代谢解释患儿的临床表现及实验室检查结果 红细胞减少 血压降低 排尿酱油色 皮肤及巩膜黄染 总胆红素，未结合胆红素均增加，结合胆红素略微增加 蚕豆病的分子发病机制 ⒈红细胞内的糖代谢以无氧代谢为 主，但也有少量的是通过磷酸戊糖旁路。 ⒉G6PD是磷酸戊糖旁路代谢途径中的第一个酶。也是第一个限速酶（关键酶）。 ⒊它催化葡糖-6-磷酸生成6磷酸葡萄糖酸内脂，同时生成NADPH。 ⒋NADPH作为供氢体。参与体内的多种代谢反应，其中之一是维持谷光甘肽的还原状态。 在红细胞中还原性GSH具有重要作用。它可以保护红细胞膜蛋白的完整性。如红细胞缺乏G6PD，不能经磷酸戊糖途径得到充分的NADPH，则难使GSH处于还原状态，此时红