第二节兰州大学基因工程基因工程酶学基础.pptVIP

第六节 单链DNA内切酶 基因突变 * * (a)用5`末端特异的核酸内切酶处理DNA片段A和B，形成了延伸末端， (b)对片段A和B分别加入dATP和dTTP以及共同的末端脱氧核苷酰转移酶，各自形成poly(dA)和poly(dT)尾巴； ?混合退火，通过poly(dA)和poly(dT)之间的互补配对，形成重组体分子； (d) 转化大肠杆菌挑选重组体克隆 * 衔接物的5`末端和待克隆的DNA片段5`末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具有衔接物的DNA分子和克隆载体分子， * 由人工合成一头具有某种限制性内切酶粘末端，另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸片段。它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子 * 在DNA分子的单链缺口上，DNA聚合酶I的5`-3`核酸外切酶活性和聚合作用可以同时发生。 当外切酶活性从缺口的5`一侧移去一个核苷酸之后，聚合作用就会在缺口的3`一侧补上一个新的核苷酸。但由于PolI不能够在3`-OH和5`-P之间形成一个键，因此随着反应的进行，5`一侧的核苷酸不断地被移去，3`一侧的核苷酸又按序地增补，于是缺口便沿着DNA分子按合成的方向移动。这种移动特称为缺口转移 * 1、DNA聚合酶I反应条件 用途－ DNA杂交探针的制备 缺口转