中药复方962胶囊对老年大鼠海马区神经生长因子及.docVIP

　　中药复方962胶囊对老年大鼠海马区神经生长因子及 摘 要　 目的：在老年性痴呆的发病中，年龄是最主要的危险因素，随年龄增长，发病率显著增高，自然衰老大鼠模型是比较接近老年性痴呆病理改变的动物模型。我们以往的实验证明：中药复方962胶囊(含何首乌、石葛蒲等六味中药)能显著改善老年大鼠学习记忆功能。本研究观察中药复方962胶囊对自然衰老大鼠模型海马CAI—CA4区神经生长因子(NGF)及其受体TrK A表达的影响，探讨中药复方962胶囊治疗改善学习记忆功能的作用机理。方法：雌性)0.56g/kg，中药复方962胶套高剂量1.8g／kg，962胶囊低剂量0.9g／kg，每日灌胃给药一次，连续灌胃2个月，进行学习记忆实验(水迷宫)和旷场分析后，每组随机选取5只，灌注固定，冰冻切片，片厚40μm，每份标本均ABC法行NGF和TrK A免疫组化染色。采用法国Noesis Vision公司VISILOG5.0图象分析系统对组织切片进行分析。显微镜放大倍数为10×10，在海马CAl区锥体细胞层连续摄取3个视野，这三个视野包括了整个CAl区，记数3个视野内总阳性细胞数量、 阳性细胞总面积(象素单位)及阳性细胞灰度积分值(灰度单位)。海马CA2区连续摄取2个视野，海马CA3区连续摄取2个视野，海马CA4区摄取齿状回包含的1个视野，包括了整个CA2、CA3、CA4区。数据用均数±标准差表示(M±SD)，结果采用t检验。结果：①老年大鼠海马CAl、CA2、CA3、CA4区NGF表达较青年对照明显减少，阳性细胞数量为青年对照的19.89％，11.46％，6.65％和26.32％；阳性细胞总面积为青年对照的13.97％，6.76％，5.19％和25.01％；阳性细胞灰度积分值为青年对照的41.05％，35.49％，16，74％和29.17％。海马CAl、CA2、CA3、CA4区神经生长因子受体Trk A表达较青年对照也明显减少，阳性细胞数量为青年对照的12.42％，7.07％，9.26％和 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 lang=EN-US29.33％；阳性细胞总面积为青年对照的7.61％，4.92％，5.62％和23.79％；阳性细胞灰度积分值为青年对照的29，30％，18.70％，17.51％和34.19％。以CA2、CA3区的减少最严重。⑦中药复方962胶囊和脑复康均能提高老年大鼠海马CAl一CA4区NGF和Trk A阳性细胞数量、阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值，962胶囊高剂量组基本恢复青年对照组水平。结论：老年大鼠神经生长因子(NGF)及其受体Trk A在海马区表达明显减少，可能与其学习记忆能力下降有关；中药复方962胶囊能够明显促进老年大鼠海马区NGF及受体TrK A表达，可能是改善其学习记忆功能的药理学基础。增强内源性神经营养物质的表达对老年性疾呆的治疗有重要意义。 关键词　中药　老年　大鼠神经生长因子　TrK A受体 前　言 　　老年性疾呆(Alzheimer’s disease。AD)是一种老年神经退行性疾病，临床以进行性记忆障碍和后天获得性知识丧失为特征，原因不明，尚元有效的治疗方法。自然衰老大鼠模型是比较接近老年性痴呆病理改变的动物模型。我们以往的实验证明：我室自行组方并研制的新复方962胶囊(含何首乌、石葛蒲等六味中药)能显著改善老年大鼠学习记忆功能。神经生长因子(nerve growth factor，NGF)在调节神经元生长和存活方面起着重要作用，AD过程中神经元的丢失至少部分是由于神经营养因子的缺乏。本文观察自然衰老大鼠脑内是否发生神经生长因子(NGF)及其受体Trk A表达的变化，以及962胶囊对内源性NGF及其受体Trk A表达的影响，探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。 　　材料和方法 1 药品：　中药复方962胶囊，委托北京第四制药厂加工提供，批号：980515，每克干粉含生药量6.25克。实验时采用水溶解，动物灌胃量10m1／kg。阳性对照药品：脑复康 (piracetam)，由北京市曙光制药厂提供，批号：970618，京卫药准字(1996)第138050号。实 验时用水溶解配成0.056g／m1。 2 动物：　Wistar大鼠雌性，老年大鼠为22月龄(体重330±32g)，青年为5月龄(体重325±19g)。购于北京医科大学动物中心，动物证号：医动字01—3056。 3 试剂与主要仪器：　ABC试剂盒、神经生长因子(NGF)兔抗鼠抗体、酪氨酸蛋白激酶受 体A(Trk A，主要为NGF的受体)兔抗鼠抗体均购自北京中山试剂公司；恒温冷冻切片机为英国山盾公司ASE—620型，光学显微镜为Ni