原花青素通过内质网应对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤作用.docVIP

原花青素通过内质网应对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤作用 　　[摘要] 目的 ?^察原花青素（PCs）通过抑制内质网应激对H9C2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）后损伤的保护作用。方法 将培养的H9C2心肌细胞随机分为5组：对照组、缺氧/复氧组（H/R组）、低剂量PCs+H/R组（LPCs组）、中剂量PCs+缺氧复氧组（MPCs组）、高剂量PCs+缺氧复氧组（HPCs组）。对照组心肌细胞正常培养至实验结束，H/R组行缺氧3 h后复氧3 h，PCs组分别于缺氧前30 min给予50、100、200 μg/mL 的PCs培养再行缺氧/复氧过程。实验后MTT法测定细胞生存率；测定乳酸脱氢酶（LDH）活性；流式细胞术检测心肌细胞凋亡；Western blot测定内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白（CHOP）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、Caspase-12的表达。结果 与对照组比较，H/R组细胞生存率显著降低（P 0.05），LDH活性和细胞凋亡率显著升高（P 0.05）；H/R组GRP78、CHOP、p-JNK、Caspase-12蛋白表达较对照组明显增加（P 0.05）；给予不同浓度PCs干预后，PCs预处理组细胞生存率较H/R组明显升高（LPCs组除外），LDH活性和细胞凋亡率明显降低（P 0.05），PCs预处理组GRP78、CHOP、p-JNK、Caspase-12蛋白表达较H/R组明显下降（P 0.05），中高剂量PCs抑制作用较低剂量强（P 0.05）。结论 H/R可诱导心肌细胞内质网应激，引起细胞损伤和凋亡；PCs可以通过抑制内质网应激发挥其保护作用，减少细胞损伤和凋亡。 　　[关键词] 原花青素；H9C2心肌细胞；缺氧/复氧；内质网应激 　　[中图分类号] R542 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）11（b）-0029-05 　　[Abstract] Objective To observe the protective effect of proanthocyanidins （PCs） on hypoxia/reoxygenation （H/R） injury by attenuating endoplasmic reticulum stress （ERS） in H9C2 cardiomyocytes. Methods The H9C2 cardiomyocytes were randomly divided into five groups： control group， hypoxia/reoxygenation group （H/R group）， low-dose PCs+H/R group （LPCs group）， middle-dose PCs+H/R group （MPCs group）， high-dose PCs+H/R group （HPCs group）. H9C2 cardiomyocytes of control group were cultured under normal condition till the end of experiment. Cardiomyocytes of H/R group underwent hypoxia for 3 hours followed by reoxygenation for 3 hours. Different doses of PCs （50， 100， 200 μg/mL） were given 30 minutes before hypoxia in the PCs groups. Cell viability by MTT， lactic dehydrogenase （LDH） activity， cell apoptosis ratio by flow cytometric measurement and the protein expression of glucose-regulated proteins 78 （GRP78）， C/EBP-homologous protein（CHOP）， phosphorylation of c-Jun-N-terminal protein kinase（p-JNK） and Caspase-12 were detected. Results Compared with the control group， cell viability decreased significantly and LDH activity and apoptosis ratio increased si