一种中药肾毒性成分体外检测方法的建立.PDFVIP

学 报 ５２６ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１２，４３（６）：５２６－５２９ 一种中药肾毒性成分体外检测方法的建立 １ ２ ３ ４ 龙　军 ，许　立 ，袁冬平 ，蒋建伟 １ ２ （南京中医药大学临床药学教研室，南京２１００４６；南京中医药大学江苏省中药药效与安全性评价 ３ ４ 重点实验室，南京２１００２９；南京中医药大学药理学教研室，南京２１００４６；太仓市中医医院，太仓２１５４００） 摘　要　通过常规方法培养可稳定表达绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）的ＨＫ２细胞，应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和荧光显微镜分析肾 毒性药物阿米卡星对ＨＫ２细胞ＧＦＰ表达及荧光强度的影响。通过测算已知的４种中药肾毒性成分（汉防已碱、马兜铃 酸、雷公藤甲素、芦荟大黄素）的ＩＣ和ＦＣ ，分析两者的相关性。结果显示阿米卡星可诱发ＨＫ２细胞内的荧光产生并在 ５０ ５０ ２４ｈ内逐渐增强，ＧＦＰ蛋白的表达在２４ｈ时明显增加（与对照组比，Ｐ＜００１）。４种中药肾毒性成分的ＩＣ和ＦＣ之间具 ５０ ５０ 有良好的相关性。稳定表达ＧＦＰ的ＨＫ２细胞内的荧光强度的变化可以较好地反映细胞损伤程度。该方法的建立为中药 成分的肾毒性的检测和早期预测提供了有力的工具。 关键词　中药肾毒性；ＨＫ２细胞；热休克蛋白７０；绿色荧光蛋白 中图分类号　Ｒ９９　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１２）０６－０５２６－０４ ＭｅｔｈｏｄｆｏｒｉｎｖｉｔｒｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ １ ２ ３ ４ ＬＯＮＧＪｕｎ牞ＸＵＬｉ牞ＹＵＡＮＤｏｎｇｐｉｎｇ 牞ＪＩＡＮＧＪｉａｎｗｅｉ １ ２ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙ牞ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１００４６牷ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｆｆｉｃａｃｙａｎｄＳａｆｅｔｙ ３ ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ牞ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９牷ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ牞 ４ ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１００４６牷ＴａｉｃａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＴＣＭ牞Ｔａｉｃａｎｇ２１５４００牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＡｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓＨＫ ２ｃｅｌｌｓｗｉｔｈｓｔａｂｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ牗ＧＦＰ牘ｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｒｏｕｔｉｎｅｌｙＷｅｓｔｅｒｎ