生物样品内中药成分分析的特点1干扰大.PPT

（1）沉淀蛋白法：向组织匀浆中加入一定量的甲醇、乙腈、高氯酸、三氯醋酸等沉淀试剂，沉淀蛋白质后，离心，取上清液备用。 该法操作简单，但部分药物回收率低。 （2）酸水解或碱水解法：向组织匀浆中加入一定 量的酸或碱，待组织在水浴中液化后，高速 离心，取上清液备用。 该法仅适用于在热酸或热碱条件下稳定的药物。 （3）酶水解法：组织匀浆中加入一定量的酶和缓冲液，待组织在水浴上液化水解一定时间后，离心，取上清液备用。 最常用的酶：枯草菌溶素 特点：可用有机溶剂直接萃取而无乳化现象，但酶水解法不适用于碱性条件下易水解的药物。 3.贮存 如不能及时检测，短期保存时，可置冰箱（4℃）中；长期保存时，须置冰柜（低于-20℃）中。 二、生物样品的前处理 （一）离线生物样品前处理方法 1.去除蛋白质法 2.净化、富集 3.缀合物的水解 1.去除蛋白质法 （1）加入与水相混溶的有机溶剂 （2）加入中性盐加入中性盐 （3）加入强酸 （4）加入含锌盐及铜盐的沉淀剂 （5）超滤法 （6）酶水解法 2.净化、富集 （1）液-液萃取法 （2）固相萃取法 （3）固相微萃取 3.缀合物的水解 （1）酸水解 （2）酶水解 （3）溶剂解 （二）在线生物样品前处理方法 1. 柱切换技术 2. 限制进入固定相与HPLC仪器联用的 在线固相萃取技术 3. 其他联用技术 第三节 生物样品分析方法的建立与验证 一、常用生物样品分析方法 二、生物样品分析方法的建立 1.检测条件的优化　 2.分离条件的优化 三、生物样品分析方法的验证 三、生物样品分析方法的验证 1.专属性 2.标准曲线和定量范围 3.精密度与准确度 4.样品稳定性 5. 提取回收率 * ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? * * 中药分析学 第八章 生物样品内中药成分的分析 目 录 第一节 概 述 第二节 生物样品的制备 第三节 生物样品分析方法的建立与验证 第四节 生物样品内中药成分分析实例 第一节 概 述 一、生物样品内中药成分分析的意义和任务 二、生物样品内中药成分分析的特点 一、生物样品内中药成分分析的意义和任务 任务 1.分析方法学的研究 2.生物样品内中药成分研究 3.生物样品内源性物质的测定和研究 意义 生物样品内中药化学成分的分析，对中药成分在生物体内的变化规律及代谢产物对原型药物的药理及毒理学评价极为重要。 二、生物样品内中药成分分析的特点 1. 干扰大； 2. 样品量少； 3. 待测成分浓度低； 4. 样品稳定性差； 5. 待测成分存在形式多样 。 第二节 生物样品的制备 一、常用生物样品的采集与贮存 二、生物样品的前处理 * * 生物样品的种类 生 物 样 品 器官、组织 体液 排泄物 血液、尿液、唾液、毛发、乳汁、 精液、脑脊液、泪液、胆汁、 胃液、胰液、淋巴液、粪便等 粪便、尿液等 心、肝、脾、肺、肾、 脑、子宫、卵巢、 睾丸等 一、常用生物样品的采集与贮存 （一）血样 主要用于药代动力学、生物利用度及临床治疗药物浓度监测等研究 1. 血样的采集 1. 血样的采集 可用负压采血管；注射器；毛细管；特殊的微量采血管采集。 2. 血样的制备 （1）血浆的制备 采集的血液置抗凝素处理的试管中，以2500 ~3000r/min离心5~10分钟，使血细胞沉淀分离，所得淡黄色上清液即为血浆。 肝素作为常用的抗凝剂 2. 血样的制备 （2）血清的制备 将采集的血液置试管中，放置0.5~1小时，待血液凝固的，剥去血饼，再以2500~3000r/min离心5~10分钟，所得上层淡黄色液体即为血清 2. 血样的制备 （3）全血的制备 将采集的血液置含有抗凝剂试管内，无需离心，使血浆和血细胞保持混合状态，即为全血。 3. 血样的贮存 血浆和血清及时分离（不宜超过2小时）后保存。短期保存，置冰箱中（4℃）；长期保存，置冰柜中（-20℃）。 (二) 尿液 主要用于药物剂量回收、药物尿清除率、生物利用度、药物代谢物组学等研究 。 1.尿液的采集 尿液样品采集自然排出的尿液。 包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿。 2.尿液的贮存 　收集的尿液不能立即测定，可加入甲苯、醋酸、浓盐酸等防腐剂，置冰箱（4℃）中保存24~36小时，或不加防腐剂直