GB/T 17494-1998马传染性贫血病间接ELISA技术规程.pdf

GB/T17494-1998 前 言 马传染性贫血病(简称马传贫，下同)的流行，曾给我国养马业造成巨大的经济损失。经过多年的防 制，在全国范围内取得显著成效，已达到控制标准。为消灭马传贫，提供一个先进有效、特异敏感、反应快 速、操作方便、易于推广的检测方法，是十分必要的。为此制定马传染性贫血病间接ELISA技术规程。 马传贫间接ELISA技术自1983年建立以来，已在全国主要养马省区推广应用十余年之久，在马传 贫防制工作中发挥了重要作用。特别是研制的试剂实现了标准化、商品化，并以低耗优质的产品质量，为 该方法推广应用奠定了基础，在这方面我们已走在世界前列。 本标准的附录A、附录B,附录C都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由中华人民共和国农业部畜牧兽医司归口。 本标准由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所负责起草。 本标准起草人:戴玉坤。 中华人民共和 国国家标准 马传染性贫血病间接ELISA技术规程 GB/f17494-1998 RulesofindirectELISAtechnique forequineinfectiousanemiadisease 1 范围 本标准规定了马传染性贫血病间接ELISA技术规程的测定原理、仪器设备、试剂、配制溶液、操作 步骤、结果判定。 本标准适用于检测马血清中的马传贫疫毒抗体。可用于生产和经营马匹者对未注射马传贫疫苗马 匹的检疫，马传贫病马的定性;也可用于对注射马传贫疫苗马匹的免疫状态进行测定。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 NY127-1987 马传贫酶联免疫吸附试验(ELISA间接法)抗原、酶标记抗体制造及检验试行规 程 3 测定原理 用特制的马传贫病毒抗原(NY127)，包被聚苯乙烯微量板孔，使免疫反应在固相载体上进行。当被 检血清中有马传贫病毒抗体存在时，则与孔壁上的抗原形成抗原一抗体复合物，再与酶标记的抗体(抗马 免疫球蛋白)反应，最后通过测定酶作用底物催化后的产物，进行定性、定量抗体测定。 4 仪器设备 吸管:1mL,5mL,10mL; 量桶:50mL,100mL,1000mL; 烧杯:50mL,100mL; 玻璃滴管:每滴体积约20^-30pL; 血清稀释板:2。孔板每孔容积为1mL; 定量加液器:1mL分装定量; 微量吸液器:50pL,100pL; 分析天平:感量。.001g; 托盘夭平:感量。.01g; 水浴锅 ; 酶标测试仪。 5 试荆 除特别注明外，所用试剂皆为分析纯。 国家质f技术监督局1998一08一31批准 1999一01一01实施 GB/r17494-1998 磷酸氢二钠; 磷酸二氢钠; 氯化钠; 柠檬酸; 磷苯二胺(化学纯); 过氧化氢(浓度30%); 吐温-20(Tween-20); 白明胶(Gelatinwhite)(E.Merck); 健康牛血清(无污染); 浓硫酸(纯度95%-98%); 酶标记抗体(冻干品，活性和特异性应符合NY127，见附录A); 马传贫病毒抗原包被板(活性和特异性应符合NY127，见附录B); 阴性及阳性对照血清(冻干品，活性和特异应符合NY127). 6 配制溶液 6.1磷酸盐缓冲液(0.02mol/LpH7.2PBS) 6.1.10.2mol/L磷酸氢二钠溶液:称取磷酸氢二钠(NaiHPO,·12HzO)71.64g，先加适量的去离子 水加热溶解，最后定容至1000mL,混匀。 6.1.2 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:称取磷酸二氢钠(NaH,PO,2H,O)31.21g，先加适量