大鼠酒精性心肌病心肌超微结构及血清TNF―α和MDA变化及意义.docVIP

大鼠酒精性心肌病心肌超微结构及血清TNF―α和MDA变化及意义 　　摘要：目的 研究大鼠酒精性心肌病（ACM）心肌超微结构及血清TNF-α和MDA的变化及意义。方法 采用灌胃法制备大鼠酒精性心肌病模型，模型组用40%酒精8g/（kg.d）分二次灌胃共12w，对照组灌等量的生理盐水，实验第8、12w末分批处死动物。用光学显微镜及电子显微镜观察大鼠心肌超微结构，测量血清TNF-α和MDA的变化。结果 与对照组相比模型组模型组可见大鼠心肌病变及炎性细胞浸润及血清TNF-α和MDA的变化。结论 长期摄入酒精可引起大鼠酒精性心肌病，TNF-α和MDA在酒精性心肌病过程中的发生发展中发挥重要作用。 　　关键词：酒精性心肌病；肿瘤坏死因子；丙二醛；电子显微镜；大鼠 　　酒精性心肌病（alcoholic cardiomyopathy （ACM））是指由于酒精长期摄入过量而导致的心肌损害等一系列病变。细胞变性、死亡是导致许多心脏疾病终末期表现和衰竭的重要机制，一些研究初步证实酒精导致细胞变性和死亡[1-3]。其原理可能是免疫反应和酒精直接损害心肌细胞是造成ACM的主要因素，对ACM的发生发展起着十分重要的作用。ACM的心肌损伤程度主要取决于细胞因子，这些因子包括TNF-a、MDA 等。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 雄性Wistar大鼠由延边大学医学院动物科提供，体重为（180±10）g。利用放射免疫分析法检测血清TNF-a的水平，用硫代巴比妥酸（TBA）法测定血清丙二醛（MDA）的含量。 　　1.2大鼠ALD模型制造和取材 Wistar大鼠随机分为两组，模型组44只给予40%酒精（8g/kg.d）分二次灌胃共12w，对照组22只给予等量的生理盐水灌胃。实验第8，12w末分别处死22只动物，心脏采血，取心脏 一部分10% 中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。另一部分用4%戊二醛保存送电镜室作电镜标本，试验模型参照文献[4]。 　　1.2血清TNF-a的测定 　　1.2.1试剂配制 ①125I-TNF1瓶（冻干品）：低温保存，用前加缓冲液100ml；②TNF抗体1瓶（冻干品）：用前加缓冲液12ml；③TNF标准品5瓶（冻干品）：用前每瓶加缓冲液1.5ml，其浓度为：0.3， 0.9， 2.7， 8.1， 24.3ng/ml；④免疫分离试剂1瓶（悬浮液）：用前充分摇匀；⑤缓冲液1瓶。 　　1.2.2将-70°保存的血清恢复至室温。复融混匀，4℃3000rpm离心，取上清液测定。 　　1.2.3测定 采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按表1操作。 　　1.2.4计算结果 由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。 　　1.3丙二醛的测定 原理：过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰。方法：血清中MDA测定按下列步骤进行，见表2。 　　按下列公式计算： 　　MDA含量（nmol/ml）=■×标准品浓度（10nmol/ml） 　　×样本测试前稀释倍数 　　1.4统计学处理 采用SPSS11.5统计软件计量资料用均数±标准差（x±s）表示，P0.05为提示两者之间有显著性差异。 　　2 结果 　　2.1一般情况 对照组大鼠毛发光量，动作灵活，食欲和大便正常，无溏便；模型组大鼠随着进食酒精的时间延长，毛发越无光泽，食欲减退，体重增长缓慢，数只大鼠先后出现溏便。在白酒灌胃后，出现精神萎靡，行动迟缓，上述现象可于3～4h后缓解。 　　2.2心脏肉眼观察 模型组心脏心外膜下可见白色点状、条索状或斑块状病灶，随着进食酒精的时间延长，症状逐渐加重。 　　2.3心肌组织病理改变 8w模型组可见心肌局灶性变性坏死，伴淋巴细胞或单核细胞浸润，部分可见坏死灶；12w可见较多心肌坏死病灶，可见程度不等的纤维化。 　　2.4心肌病变的电镜观察 模型组可见线粒体肿胀，嵴断裂甚至空泡样变，肌浆网扩张，肌丝溶解断裂，肌原纤维破坏，并可见淋巴细胞或单核细胞浸润。 　　实验8w末模型组血清TNF-a，MDA值升高与对照组比较差异显著（P0.05），12w末模型组TNF-a，MDA值进一步升高与对照组存在显著性差异（表3）。 　　2.5血清TNF-a的变化： 模型组血清TNF-a水平与对照组相比经统计学分析有显著的差异（P0.05 见表3）。 　　2.6模型组大鼠血清MDA含量和对照组相比明显增高，经统计学分析两组之间有显著的差异（P0.05），并与TNF-a水平之间也有相关性（r=0.465， P0.05）。 　　3 讨论 　　酒精是一简单的碳水化合物，饮用后以单纯扩散方式很快吸收，浓度越高吸收越快。整个胃肠道均能吸收酒精，但以小肠吸收为主