五种抗糖尿病中药提取物的PPARs激活性研究.pdfVIP

五种抗糖尿病中药提取物的PPARs激动活性 五种抗糖尿病中药提取物的PPARs激动活性 五五种种抗抗糖糖尿尿病病中中药药提提取取物物的的PPPPAARRss激激动动活活性性 研究 研究 研研究究 摘 要 本文通过研究具有抗糖尿病或利尿生津作用的中药金线莲、熟地黄、生地黄、 地骨皮以及芦根的提取物对PPARs的两个亚型PPARβ和PPARγ的激动作用，探讨 其抗糖尿病的作用是否可能是通过PPARs 介导的。 本文首先对五种中药进行了提取，得到其石油醚、乙酸乙酯、70%醇提、水提 以及水提醇沉五个部分，然后配制不同浓度的各提取物，以0.1%DMSO 及水作为 对照组，每组作3 个复孔的平行对照，在96孔细胞培养板中，针对实验所用的 Hela 细胞进行了提取物细胞毒性实验，确定了五种中药各个提取物进行PPARs 研 究实验的浓度范围 接着采用, Hela 细胞报告基因筛选模型，对中药的提取物进行 PPARs的激动实验，将报告质粒和PPARγ质粒（或PPARβ质粒）共转染Hela细胞， 得到大量表达PPARγ（或PPARβ）的Hela 细胞，用不同浓度的提取物作用转染细 胞，并分别用0.1%DMSO及水作为阴性对照组，以0.5µg/mL的非诺贝特作PPARβ 组的阳性对照，以0.5µg/mL 罗格列酮作PPARγ组的阳性对照。最终进行荧光素酶 活性检测，以药物作用组与阴性对照组的比值为参考标准，筛选出对PPARβ（或 PPARβ）有激动作用的提取物 对于PPARβ有激动作用的包括金线莲（石油醚部分：200µg/mL）、熟地黄（石 油醚部分：100µg/mL）及芦根（乙酸乙酯部分：200µg/mL），激活倍数分别为4.93 倍、4.93倍及3.33倍。五种中药对于PPARγ均有一定激动作用，激活倍数分别为 3.69倍、2.9倍、2.95倍、6.27倍、7.48倍（金线莲、熟地黄、生地黄、地骨皮、 芦根）；其中以芦根的乙酸乙酯部分的激动作用最为显著，激活倍数达7.48倍。 ： ： 关键词：：糖尿病，中药提取物，过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)，天然激动 I 剂 II 目 录 中文摘要I ABSTRACTII 目 录IV 1 绪论1 1.1 五种中药的抗糖尿病作用研究概况1 1.1.1 金线莲的抗糖尿病作用研究概况1 1.1.2 熟地黄及生地黄的抗糖尿病作用研究概况2 1.1.3 地骨皮的抗糖尿病作用研究概况2 1.1.4 芦根的抗糖尿病作用研究概况2 1.2 PPARs 对糖尿病等疾病的作用概况3 1.3 PPARγ及PPARβ的功能简介3 1.3.1 PPARγ的功能3 1.3.2 PPARβ的功能3 1.4 关于PPARγ及PPARβ激动剂的研究现状4 1.4.1PPARγ的激动剂研究现状4 1.4.2 PPARβ的激动剂研究现状5 1.5 小结6 2 实验部分7 2.1 实验材料7 2.2 主要仪器7 2.3 试剂8 2.4 中药不同极性组分的提取9 2.5 中药提取物的MTT细胞毒性实验12 2.5.1 含胎牛血清双抗的培养基（DMEM）的配制12 2.5.2 MTT细胞毒性实验具体操作步骤12 2.6 中药提取物激动PPARγ及PPARβ的研究内容13 2.6.1 基本实验13 2.6.2 中药提取物对PPARγ与PPARβ 的激动作用实验16 3 结果及分析讨论18 3.1 MTT细胞毒性实验结果及分析讨论18