大豆皂苷对D半乳糖胺及内毒素所致小鼠急性肝损伤保护作用.docVIP

大豆皂苷对D半乳糖胺及内毒素所致小鼠急性肝损伤保护作用 　　[摘要] 目的：研究大豆皂苷对D-半乳糖胺（GalN）及内毒素（LPS）联合诱发的急性肝损伤的保护作用。方法：将实验小鼠按体重随机分为5组，即正常组、模型组、阳性对照水飞蓟素组（0.10 mmol·kg-1）及大豆皂苷高、低剂量组（0.24，0.12 mmol·kg-1）。每日给药1次，连续7 d。实验末期，除正常组外，其余组小鼠腹腔注射GalN和LPS建立急性肝损伤模型，苏木素-伊红（HE）染色法观察肝组织病理学变化，ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α），比色法检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）以及肝脏过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST）活性及还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量和Caspase-3，Caspase-8活化水平。结果：大豆皂苷明显降低GalN和LPS联合诱导的急性肝损伤小鼠血清ALT，AST活性，减轻肝组织病理损伤，降低血清TNF-α水平，降低肝NO和MDA水平，升高肝组织CAT，GPx，GST活性和GSH水平，降低肝组织Caspase-3和Caspase-8活化水平。结论：大豆皂苷对GalN和LPS联合诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用，其机制可能与其抗氧化活性和抗肝细胞凋亡作用有关。 　　[关键词] 大豆皂苷；肝损伤；抗氧化；凋亡 　　流行病学调查证实，常食大豆有助于预防癌症和心血管疾病的发生，而这些均与大豆中的异黄酮和皂苷等活性物质密切相关。大豆皂苷是存在于大豆中的一类五环三萜的糖苷，主要分为A类、B类、E类和DDMP皂苷[1]。具有抗氧化、抗癌、防治心血管疾病及免疫增强等多种药理作用[2-3]。研究还表明，大豆皂苷对酒精性肝损伤以及半刀豆球蛋白A所致免疫性肝损伤具有保护作用[4-5]。本实验通过建立D-半乳糖胺（GalN）及内毒素（LPS）联合诱导的小鼠急性肝损伤模型，观察大豆皂苷对小鼠急性肝损伤的保护作用，为大豆皂苷的开发利用提供科学依据。 　　1 材料 　　1.1 动物 昆明小鼠，雄性，体重18～22 g，由延边大学实验动物中心提供。 　　1.2 药物和试剂 大豆皂苷（纯度≥80%）购于华北制药股份有限公司；GalN及LPS购于Sigma公司；水飞蓟素购于沈阳东陵药业股份有限公司；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST）、还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）及蛋白试剂盒购于南京建成科技有限公司；TNF-α ELISA试剂盒购于武汉博士德公司。 　　1.3 仪器 3-30K型离心机（德国Sigma公司）；S22PC型分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；RT-2100型酶标仪（深圳雷杜公司）；ZMN-7803型组织包埋机（常州市华利电子有限责任公司）；RM2126型切片机（上海徕卡仪器有限公司）；BA200型生物显微镜（中国麦克奥迪实业集团有限公司）。 　　2 方法 　　2.1 动物分组及处理 将50只小鼠按体重随机分为5组，即正常组、模型组、水飞蓟素组（0.10 mmol·kg-1）、大豆皂苷高、低剂量组（0.24，0.12 mmol·kg-1）。每日灌胃给药1次，连续7 d，正常组及模型组小鼠则以等体积生理盐水灌胃。末次给药1 h后，除正常组腹腔注射无菌生理盐水外，其余各组小鼠腹腔注射给予2.26 mmol·kg-1 GalN和10 μg·kg-1 LPS（用无菌生理盐水配制）。造模期间禁食，不禁水。 　　2.2 血清转氨酶及TNF-α水平的检测 造模1.5 h后，分离血清，检测小鼠血清TNF-α。造模8 h后，分离血清，检测小鼠血清ALT，AST活性，并按公式计算药物对TNF-α及转氨酶活性的抑制率。 　　抑制率= （模型组-治疗组）/（模型组-正常组）×100% 　　2.3 肝组织病理学检查 造模8 h后处死动物，取小鼠肝左叶，固定于10%福尔马林溶液中，常规石蜡包埋、切片、HE染色，在光镜下观察肝组织病理学变化。 　　2.4 肝组织氧化应激、抗氧化活力及凋亡相关指标的检测 4 ℃裂解肝细胞，离心取上清。按照各测试盒操作方法测定CAT，GPx，GST，GSH，MDA，NO水平以及肝细胞Caspase-3和Caspase-8活性的相对活化程度。 　　2.5 统计学处理 数据以±s表示，组间均数比较采用SPSS 11.5统计软件，进行单因素方差分析和Turkeys多因素t检验。 　　3 结果 　　3.1 大豆皂苷对急性肝损伤小鼠血清ALT和AST活性的影响 与正常组比较，模型组小鼠血清ALT和