大鼠急性脑出血后对重要脏器影响及外周血核因子κB表达研究.docVIP

大鼠急性脑出血后对重要脏器影响及外周血核因子κB表达研究 　　摘要：目的 观察大鼠急性脑出血后肝、肾、肺功能和形态改变及外周血淋巴细胞核因子-κB活性。方法 采用脑内注射凝固自体动脉血建立大鼠脑出血模型,于24 h 后测定外周血淋巴细胞核因子-κB（NF-κkB）活性，丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN） 和肌酐（Cr） 的水平及血氧饱和度（SaO2）水平,并取肝脏和肺组织固定、切片、HE 染色,光镜观察肝、肺组织的病理形态学改变。结果 大鼠脑出血24 h 后血清中的ALT、AST、BUN 和Cr 含量均有显著增加,NF- κB活性升高，SaO2下降，与假手术对照组比较差异有统计学意义（P0.05） 。光镜观察发现脑出血大鼠的肝脏及肺脏有炎性反应改变。结论 大鼠急性脑出血后其肝脏、肾脏、肺脏的功能和结构均受到一定损害，外周血淋巴细胞NF- κB表达升高。 　　关键词：脑出血；大鼠；肝功能；肾功能；肺功能；核因子-κB 　　中图分类号：R743.3 R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）07-0851-02 　　 　　急性脑出血患者并发多脏器功能障碍综合征在临床上较常见，可影响患者的预后，是急性脑血管病致死的主要原因之一。目前在外科与创伤领域,动物及临床研究均证实全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）是发展为全身多脏器功能损害（multiple organ dysfunction syndrome,MODS）的必由之路［1］。核因子-κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）在全身炎症反应中起着关键的作用［2］。本实验观察大鼠脑出血后肝、肾、肺等脏器功能和病理学改变，及外周血核因子-κB的表达，了解急性脑出血后对上述重要脏器的影响及其与核因子- κB表达的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 健康雄性SD大鼠20只,体重250 g～ 300 g,由中山医科大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为脑出血组、假手术组,每组10只。 　　1.2 方法 　　1.2.1 大鼠脑出血模型制作［3］ 根据大鼠立体定向图谱确定拟注入的左侧尾状核位置，将大鼠用10%水合氯醛（300 mg/kg）腹腔注射麻醉后，凝固血组大鼠完成立体定向术后从术后从立体定向仪上取下，仰卧位固定，右侧腹股沟备皮，纵行切口，暴露并分离右侧股动脉，结扎远心端，用 1 mL注射器接4.5号头皮外穿刺股动脉抽取100 μL自体动脉血，立即注入更换了针头的50 μL微量注射器内，结扎股动脉近心端，缝合皮肤。血液静置5 min使之充分凝固。微量注射器接套管针将凝固血快速注入靶点内（注射速度20 μL/min）。留针30 min后拔除套管针。假手术组大鼠完成立体定向术及股动脉抽血，但不注血。 　　1.2.2 核因子-κB活性测定 外周血淋巴细胞分离、涂片，抗 NF-κB-p65单克隆抗体购自 Thermo Scientific公司,工作浓度1∶100。假手术组淋巴细胞涂片作为阳性对照。采用 Envision两步法进行 。结果判定,细胞核上呈现棕黄色为阳性,未见着色细胞者为阴性。每一玻片任选 5个高倍视野（×400）,计算阳性细胞百分率（阳性细胞数 /计数细胞总数×100%）。 　　1.2.3 血清酶及血氧饱和度含量等测定 各组麻醉后24 h,经腹主动脉取血,离心取上清,使用日立公司的全自动生化分析仪，及血气分析仪常规测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平及血氧饱和度（SaO2）的水平。 　　1.2.4 病理形态学观察 取肝肺组织,经10%中性甲醛固定24 h 后,常规石蜡包埋、切片,HE染色。光学显微镜下观察肝脏及肺脏结构形态的改变。 　　1.3 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 12.0分析,组间比较采用t检验。 　　2 结 果 　　2.1 大鼠脑出血模型观察 凝固血组所有10只大鼠清醒后观察其行为改变,均出现右侧肢体偏瘫,旋转爬行或拖步行走等,取脑时尾状核内均可见血肿形成。原发血肿局限在尾状核内,形态较规则,呈椭圆形,占位效应明显，表明脑出血模型制作成功。假手术组大鼠未出现上述神经缺损症状,脑内亦无血肿形成,可排除脑出血。 　　2.2 大鼠ALT、AST、SaO2、BUN、Cr和NF-κB表达的 大鼠脑出血后24 h 血清中ALT、AST 的含量均明显增高,血氧饱和度下降，与假手术组比较差异有统计学意义（P0.05）。大鼠急性脑出血后其肝功能及肺功能受损。大鼠脑出血后24 h 血