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大鼠皮肤类过敏试验评定标准探讨 　　[摘要]该研究通过对大鼠皮肤类过敏试验各项特征指标的研究，选定同只动物给药部位皮肤蓝斑OD与对照部位皮肤蓝斑OD比值（K）作为新的评定标准。并以有临床类过敏反应报道的常用造影剂、中药注射剂和注射剂原料药或辅料为受试药物进行大鼠皮肤类过敏试验，以对K进行界定：K2为类过敏反应阳性；1.2≤K≤2为类过敏性可疑；K1.2为类过敏反应阴性。以此标准对受试药物的类过敏性进行评定。评定结果与经典标准的评定结果进行比较，以考察K的适用性。比较结果显示，以K作为大鼠皮肤类过敏试验的评定标准，可更真实地反映皮肤蓝染的实际情况，同时将因动物个体因素造成的误差降到最低。其阳性、可疑、阴性3级标准相对蓝斑直径阳性、阴性2级标准，具有更为客观、准确的特点，建议尝试选择K作为药物致大鼠皮肤类过敏反应的评定标准。 　　[关键词]大鼠皮肤类过敏试验；类过敏；评定标准；K 　　近年来，药物引起的类过敏反应受到了人们的广泛关注，有关药物类过敏试验方法的探索也已成为当今的研究热点。中国中医科学院率先建立了大鼠皮肤类过敏试验[1]，本课题组也对其方法学进行了系统的研究[2]。目前，该试验采用的类过敏反应评定指标主要为蓝斑直径[34]、蓝斑直径结合伊文思蓝渗出量[1]。然而，在对大量的中药注射剂类过敏性评价研究中发现，以蓝斑直径作为类过敏反应的评定指标存在着明显的因人而异的操作手法上的差异（伊文思蓝渗出至皮肤而形成的蓝染斑块是立体的，而蓝斑直径只能反映平面现象，即受试物注射至皮肤内的深浅而导致蓝斑直径的大与小，色质的浅与深，该指标只能偏重于前者），从而导致结果出现偏差。此外，动物的个体差异也是引起皮肤蓝斑直径或皮肤蓝染OD出现差异的重要原因，尤其是性别差异，这些差异的存在，可能导致同一受试物在不同动物个体上的检测指标出现结果的重大偏差，这对最终类过敏性的结果评定是相当不利的。直径结合OD进行评定的方法中仍是以直径评定为主，OD作为参考。并且主要是对直径和OD分别进行统计学差异的分析，统计学有差异就说明是类过敏反应阳性，无差异是类过敏反应阴性，这是不科学的。 　　为此，本课题组提出了基于蓝斑OD的单只动物的给药部位皮肤蓝斑OD与对照部位皮肤蓝斑OD的比值（K）作为大鼠皮肤类过敏试验评定标准的设想。本研究就此选用类过敏阳性药进行验证，以临床有类过敏反应报道的常用造影剂、中药注射剂及注射剂原料药或辅料进行适用性考察，旨在提高大鼠皮肤类过敏试验评定方法的可靠性，为建立一种更客观、准确的评价标准提供实验依据。 　　1材料 　　1.1动物 　　SD大鼠，清洁级，雌性，体重180～220g，购自上海西普尔必凯实验动物有限公司，许可证号SCXK（沪上述动物均在上海中医药大学实验动物中心清洁级饲养室饲养，试验期间自由饮水、摄食，室内温度20～22℃，湿度45%～70%。 　　1.2药品和试剂 　　Compound48/80（简称C48/80，Sigma公司，批号039K4023）；Tween80（聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯，Sigma公司，批号BCBF4913V）；注射用血栓通（冻干）（简称血栓通，广西梧州制药股份有限公司，批；银杏达莫注射液（简称银杏达莫，贵州益佰制药股份有限公司，批；碘普罗胺注射液[简称碘普罗胺，拜耳医药保健有限公司，批号962A）；碘海醇注射液[简称碘海醇，通用电气药业（上海）有限公司，批；复方泛影葡胺注射液（简称泛影葡胺，上海旭东海普药业公司，批号II121105）；银杏叶提取物注射液（简称金纳多，中豪国际有限公司产品，批号G4242）；注射用双黄连（冻干）（简称双黄连，哈药集团中药二厂，批号1302008）；清开灵注射液（简称清开灵，吉林省集安益盛药业股份有限公司，批；生脉注射液（简称生脉，上海和黄药业有限公司，批号120603）；脉络宁注射液（简称脉络宁，金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂，批；喜炎平注射液（简称喜炎平，江西青峰药业有限公司，批号2013032103）；丹参注射液（简称丹参，正大青春宝药业有限公司，批号1301062）；红花注射液（简称红花，太原华卫药业有限公司，批；黄芪注射液（简称黄芪，正大青春宝药业有限公司，批号1212092）；参麦注射液（简称参麦，正大青春宝药业有限公司，批号1212265）；注射用灯盏花素（简称灯盏花素，昆明龙津药业股份有限公司，批号201303082）；丹参浓缩液（贵州景峰注射剂有限公司）；盐酸川芎嗪（贵州景峰注射剂有限公司）；分析纯丙酮（国药集团化学试剂有限公司，批；伊文思蓝（国药集团化学试剂有限公