生物化学教学课件第十一章核酸的生物合成演示文稿x.ppt

复制过程是在起始阶段受到控制的。 一旦复制开始，即进行下去，直到整个 复制子完成复制。 由于DNA复制时会形成复制 叉，导致DNA双链在其解链区域看 起来象一个泡状结构或象一只眼 睛，故有时又将此泡状结构称作“复 制泡”或“复制眼”。 可见，在DNA复制的时候，碱基配对受 到双重的核对： 聚合酶对碱基的选择作用和3`—5`核酸 外切酶活性对错配碱基的校正作用。 在反应中要消耗能量，在大肠杆菌中由 NAD+提供，而哺乳动物与噬菌体感染的大肠 杆菌中则由ATP提供。 DNA连接酶不能连接游离的两条DNA。 T4 DNA连接酶则可以作用于上述切口 处，而且可以连接无单链粘性末端的平头双链 DNA，但是不能连接游离的单链DNA。 而另一条的互补链是按5`—3`方向（与 复制叉的移动方向相反）不连续合成的，即 先合成若干短片段，再经酶的作用将这些短 片段连起来而形成大片段直到形成完整的互 补链。 此为滞后链（或随后链）。 （2） 单链结合蛋白（SSB） 它与解开螺旋的DNA 单链结合，可以稳定解开的DNA 单链，并防止复性，保护DNA 单链部分不被核酸酶降解。 它主要结合在A-T碱基对较密集的部位。 （二） 原核生物的转录特点 1 ． 底物——NTP(N=A,G,C,U)； 2 ． RNA聚合酶(RNA polymerase)，纯酶活性基团的有效部分结合有Zn2+； 3 ． 模板——DNA； 6 ． 转录时的聚合反应 n1ATP+ n2GTP+n3CTP+n4UTP +DNA（模板） —— （n1AMP-n2GMP-n3CMP-n4UMP） +(n1+n2+n3+n4)PPi + DNA（模板） 不同的细菌中，α、β、β` 亚基分子量较恒定，而σ因子分子量变化较大。 从亚基组成形式来看，大肠杆菌中只有一种RNA聚合酶。 （4）σ因子：本身无催化活性，也不能单独与DNA结合，但可识别DNA上的RNA合成的起始信号，在RNA合成中起起动作用。 因为σ因子可以改变酶与DNA之间的亲和力（即静电结合力，酶为碱性蛋白，DNA为酸性分子），使酶与DNA上的特定部位即启动子结合的亲和力增强，使核心酶能够特异结合在DNA上的特定部位即启动子上。 a ．开始识别部位：RNA聚合酶的识别信号，于-35bp附近。 b ．牢固结合部位：酶的紧密结合点，于-10bp左右，此处A-T碱基对较多，有助于DNA双链局部解开。 c ．转录起始点： 　　 可以分析到，在转录的最后阶段，由转录出来的RNA之3`-polyU序列与模板之间形成的rU-dA碱基配对极弱，导致该RNA-DNA杂交链在RNA聚合酶于终止子区域暂停时解开。 　　 一般将转录时DNA上第一个核苷酸掺入的位置叫作转录起点，以“+1”表示。 转录进RNA的第一个核苷酸多为pppA或pppG。 以病毒的单链RNA为模板时，引物常常为 宿主细胞的tRNA。 以同一类型病毒RNA为模板时，逆转录 酶的活性最强。 但是逆转录酶可以带有适当引物的任何种 类的RNA作为模板合成出DNA。这种DNA叫做 互补DNA（其英文简称为cDNA）。 完 　　在合成RNA时，核心酶结合的DNA区域双链打开，呈泡状结构，常称之为转录鼓泡。 　　新生的RNA链区域会在鼓泡中与模板DNA结合形成RNA-DNA杂交链。 　　随着转录鼓泡的前进，RNA链不断合成、延长并被置换出来。 　　一般讲，在DNA上核心酶覆盖约长达60bp的区域，DNA双链的解链区约长达17bp，而RNA-DNA杂交链约长达12bp。 随着核心酶的移动，DNA双螺旋在转录方向的前方不断解开，而后面的模板DNA的互补DNA链则不断取代RNA-DNA杂交链中的RNA链以恢复DNA双螺旋。  实验表明，大肠肝菌R