姜黄素对H22肝癌S180肉瘤小鼠抑瘤作用及机制研究.docVIP

姜黄素对H22肝癌S180肉瘤小鼠抑瘤作用及机制研究 　　[摘要] 目的 探讨姜黄素对 H22肝癌、S180肉瘤小鼠的抑瘤作用及机制，为H22肝癌临床治疗提供实验依据。方法 采用ICR小鼠接种H22瘤株、S180肉瘤株分别建立肿瘤模型，采用姜黄素进行干预，明确其抑瘤作用，分阳性对照组（CTX化疗组）、阴性对照组（生理盐水组）、姜黄素低剂量组、姜黄素中剂量组、姜黄素高剂量组，每组12只。对比分析治疗组各组用药前后体重、抑瘤率的差异；动物处死后，取肿瘤组织，采用荧光定量RT-PCR测定肿瘤组织中TGF-β1RⅡ、NF-κB、CyclinD1、VEGF表达。 结果 姜黄素对肝癌和肉瘤小鼠肿瘤生长抑制率为36.04%和41.27%，有明显的抑瘤作用。与模型组比较，给药组肿瘤组织NF-κB、CyclinD1、VEGF的表达水平下调，TGF-β1RⅡ的表达水平显著升高。 结论 姜黄素通过上调肿瘤组织TGF-β1RⅡ，下调NF-κB、CyclinD1、VEGF表 　　肝癌是我国高发的、危害极大的恶性肿瘤。原发性肝癌（Primary liver cancer，PLC）的病因及分子机制尚不完全清楚，目前认为其发病是复杂过程。近年来传统中医中药在肝癌综合治疗中有明显优势[1-3]。中医药治疗与手术、放疗、化疗、免疫治疗一道被称为当前针对恶性肿瘤的五大类治疗。近几年来，从中药中寻找结构新颖和作用独特的抗肿瘤活性成分或先导化合物是抗肿瘤药物研究的一条重要途径。目前上市的抗肿瘤药很多来源于中药的提取及开发，包括紫杉来源的紫杉醇、多西紫杉醇，三尖杉来源的高三尖杉酯碱，人参来源的人参皂甙 Rg3 等。 　　姜黄，又名黄姜、郁金、宝鼎香，为姜科植物姜黄的根茎，主产于浙江、福建、湖北、四川等地，为浙江省重要的本土中药材。药理研究表明，姜黄具有保肝、利胆、抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗艾滋病、抗生育、降血脂、抗病原微生物及抗病原虫、加快创伤愈合、抗突变等作用。姜黄素主要是从姜科植物郁金中提取的一种化合物[4]。1985年Kuttan等[5]首次提出姜黄素具有抗肿瘤的作用，此后有大量研究进一步证实。吉鸿等[6]发现姜黄主要提取物姜黄素可通过抑制NF-γB-Snail信号途径来抑制乳腺癌细胞上皮间质转化过程（EMT），进而抑制其侵袭转移能力。范德生等[7]发现用姜黄素处理鼻咽癌细胞系CNE-2Z后，肿瘤细胞增殖明显受到抑制，同时细胞的侵袭和迁移能力明显降低，其机制可能与姜黄素下调EGFR的表达有关。宛传丹等[8]发现姜黄素可有效抑制肝癌细胞的增殖，并可进一步诱导细胞凋亡。刘鹏等[9]通过对免疫抑制小鼠实验，发现姜黄素能够提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数，增加B细胞抗体产生能力，增强免疫抑制小鼠脾淋巴细胞的增值，对固有免疫和适应免疫均有一定的增强作用。李然等[10]在药物毒性角度证实其安全性。介于其良好的安全性及广泛的抗肿瘤作用，本研究探讨其抗肝癌作用及具体的分子机制。 　　1 材料与方法 　　1.1一般材料 　　1.1.1 细胞株及培养 S180瘤株、人肝癌HepG2细胞株引自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所细胞库，将H22肝癌细胞株，S180瘤株接种于100 mm细胞培养皿中，加培养液，于培养箱中培养，2～3 d传代1次，取?κ?生长期细胞进行研究。 　　1.1.2 动物 ICR小鼠，SPF级，年龄：4～6周，体重18～22 g。浙江中医药大学实验动物中心，由常州卡文斯生物科技发展有限公司提供。实验动物生产许可证：SCXK（苏）2011-0003；实验动物使用许可证：SYXK（苏）2011-0036。 　　1.1.3 药物 姜黄素购自Sigma公司，分子质量368.38，以二甲基亚枫（DMSO）溶解，配制成100 mmol/L储存液，使用时用含10%胎牛血清RPMI-1640培养基稀释到所需浓度，稀释后的DMSO终质量分数5%，置于-20℃避光保存。注射用环磷酰胺：200 mg/瓶，江苏恒瑞医药股份有限公司。 　　1.1.4 主要仪器 生物倒置显微镜（日本OLYMPUS IX51）；台式低速离心机（中国上海医疗器械股份有限公司医疗设备厂80-2）；PCR仪器（美国ABI公司 9700型）。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 H22肝癌小鼠模型制备与分组 收集培养的人肝癌细胞HepG-2悬液，浓度为1×107个/mL，以每只0.1 mL接种于60只体重（20±2）g ICR小鼠右侧腋窝皮下。接种后随机分为阴性对照组、姜黄素低剂量组（10 μmol/L）、姜黄素中剂量组（20 μmol/L）、姜黄素高剂量组（40 μmol/L）、阳性对照组、每组12只。 　　1.2.2 S180肉瘤小鼠模型制备与分组 取雄性60只ICR小鼠。无菌条件下取接种