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实时荧光定量PCR技术在植物中应用 　　摘要：实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针，利用荧光信号积累来实现实时监测整个PCR反应进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术实现了PCR从定性到定量的转变。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、分类及优缺点，综述了近年来实时荧光定量PCR技术在植物中的应用概况及其研究进展，旨在为该技术的进一步开发应用提供理论参考。 　　关键词：实时荧光定量PCR技术；原理；内参基因；植物抗逆性；转基因产品 　　中图分类号：Q503；Q943.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）13-3073-05 　　DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.13.001 　　The Application of Real-time Fluorescent Quantitative PCR in Plant 　　CUI Ying，WANG Xiu-juan，GAO Shan，WANG Guo-ze 　　（School of Mathematical Physics and Biology Engineering， Inner Mongolia University of Science and Technology， 　　Baotou 014010， Inner Mongolia， China） 　　Abstract： Real-time fluorescent quantitative PCR （RQ-PCR） is a detection method by adding fluorescent dyes or fluorescent probe into the PCR reaction system，using fluorescent signal accumulation to monitor amplification reactions of PCR reaction process，and finally the unknown template can be quantitative through the standard curve.So the detection level of PCR has improved from the qualitative to the quantitative.In order to provide theoretical reference for further application，the principle， classification，advantages and disadvantages of RQ-PCR were introduced，and its application and progress in plants in recent years were reviewed. 　　Key words：real-time fluorescent quantitative PCR（RQ-PCR）；principle；reference gene；stress resistance of plant；transgenic products 　　20世纪80年代凯利?穆利斯（Kary Mullis）发明了聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction， PCR）[1]。该技术是体外快速扩增特定基因或DNA序列最常用的方法。但其定量方法只能通过凝胶电泳检测扩增产物来进行分析，由于平台效应的存在，定量的准确性受到影响，且操作过程中易污染而使得假阳性率高。准确地说常规PCR是一种定性的技术。直到1996年Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR，RQ-PCR）技术，它不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，RQ-PCR具有简便易行、灵敏度高、特异性强等优点，而且也有效解决了常规PCR假阳性率高等缺点[2]。 　　1 RQ-PCR技术的概述 　　RQ-PCR技术是在PCR基础上发展起来的，它将核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测等技术融合在一起。RQ-PCR反应即是在常规PCR反应中加入荧光化学物质，随着PCR的不断进行，PCR产物在逐步积累，荧光信号也相应地发生有规律的变化。每经过一次循环就可以收集一个荧光信号。这样就可以绘出一条荧光扩增曲线图（图1）。通常，该图呈“S”型，分为3个时期：荧光背景信号阶段、荧光信号指数期和平台期[3]。 　　在荧光背景信号阶段，由于扩增的荧光信号会被PCR仪系