宫颈癌组织中P―Akt表达及其与HPV感染关系探析.docVIP

宫颈癌组织中P―Akt表达及其与HPV感染关系探析 　　[摘要]目的：研究探讨宫颈组织中P-Akt的表达情况，并分析其与HPV感染之间的关系。方法：选取龙泉市人民医院和浙大妇产医院接受治疗并经病理诊断确诊为宫颈癌的患者35例作为研究对象，确诊后送往上级医院行手术治疗。手术前均行HPV-DNA检测，手术后上级医院采用免疫组化方法对其病变组织中的P-Akt表达情况进行测定，选择宫颈上皮内瘤变患者和慢性宫颈炎患者各35例作为对照，分别比较三组患者的P-Akt表达阳性率。并对宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者中HPV感染阳性与P-Akt表达阳性之间的关系进行比较。结果：宫颈癌患者、宫颈上皮内瘤变患者、慢性宫颈炎患者的P-Akt阳性表达率分别为97.1%、80.0%和20.0%，比较均有统计学差异（P0.05）。宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者中，HPV感染阳性患者的P-Akt阳性表达率（95.2%）也显著高于HPV感染阴性的患者（28.6%），比较有统计学差异（P0.05）。结论：P-Akt阳性表达与宫颈病变的程度、HPV感染之间都存在显著相关性。 　　[关键词]宫颈癌组织；P-Akt表达；HPV感染 　　[中图分类号]R737.33 [文献标志码]A 　　宫颈癌是妇科临床常见疾病，位居全球女性癌症发病率之首，且有逐年上升、年轻化的趋势，严重威胁女性的身体健康和生命安全。本文就龙泉市人民医院和浙大妇产医院收治的宫颈癌患者作为研究对象，探讨Akt的活化形式磷酸化蛋白激酶B（P-Akt）在肿瘤中的表达情况以及其与HPV病毒感染之间的相互关系。具体报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取龙泉市人民医院和浙大妇产医院2014年1月至2015年10月诊断为宫颈癌患者35例作为研究对象，所有患者均经手术病理诊断证实。参与本研究的患者均签署知情同意书。 　　纳入标准：患者在取材前均未接受任何治疗：年龄在18岁以上：且标本来源于手术后新鲜宫颈组织。排除标准：合并严重肝肾功能障碍的患者；合并免疫系统疾病的患者；有精神疾病病史的患者：合并血液系统疾病的患者。 　　宫颈癌患者的年龄在24岁到57岁之间，平均年龄为（39.6+3.3）岁。 　　同时，选择宫颈上皮内瘤变患者和慢性宫颈炎患者各35例作为对照，宫颈上皮内瘤变患者的年龄在22～56岁之间，平均（40.1±2.1）岁：慢性宫颈炎患者的年龄在21岁到58岁之间，平均（40.9±2.7）岁。 　　所有患者均送往上级医院接受治疗，在治疗前于我院接受过HPV-DNA检测，并在治疗后于上级医院行病变组织P-Akt表达检测，检测资料均完整准确。 　　1.2 方法 　　HPV-DNA检测：采集患者病变组织，使用PCR技术进行检测，严格按照亚能（深圳）生物科技有限公司生产的HPV核酸扩增分型检测试剂盒（生产批号YZB/国5128-2013）的操作要求，对HPV-DNA进行提取后，依次进行PCR扩增、杂交、显色，并观察检测结果。以相应片段长度处出现条带的情况为HPV感染阳性。 　　病变组织P-Akt表达检测：行手术治疗后于上级医院行病变组织P-Akt表达检测。采用免疫组化法进行检测。将获得的宫颈病变组织标本浸泡在10%的甲醛溶液中进行固定后，依次经补充固定、脱水透明、浸蜡、包埋等步骤对组织进行处理，制作石蜡块。将石蜡块切片，厚度为4μm，其中一张做常规HE染色，并在光镜下进行观察和诊断；另一张石蜡切片常规脱蜡、蒸馏水冲洗、PBS浸泡、高压修复（柠檬酸盐抗原修复液）、PBS多次冲洗、内源性过氧化酶阻断剂室温下孵育、PBS冲洗、羊非免疫血清室温孵育、除血清后依次加一抗（P-Akt1/2/3多克隆抗体）、二抗，经室温孵育、PBS冲洗后，向其中加入链霉菌抗生物索蛋白-过氧化酶，孵育、DAB染色、冲洗、复染、脱水、透明、封固后再光镜下观察。随机选取5个高倍视野（200个细胞），按照细胞的染色程度进行积分，以细胞无色记为O分，以细胞呈淡黄色记为1分，以细胞为棕黄色记为2分，以细胞为棕褐色记为3分。将光镜下细胞膜、细胞浆、细胞核有十分明显的棕黄色细颗粒判断为P-Akt表达阳性，并以阳性细胞数在5%以下记0分，在5%～25%之间记1分，在26%～50%之间记2分，在50%以上记为3分。计算其染色强度得分和阳性细胞数得分之间的乘积，并以积分≥3分P-Akt表达阳性，积分在0～2分之间为表达阴性。 　　1.3 统计学方法 　　本次实验数据采用SPSS12.0软件进行统计学分析，其中计量资料对比采用t检验，计数资料对比采用卡方检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　比较宫颈癌患者、宫颈上皮内瘤变患者、慢性宫颈炎患者的P-Akt阳性表达率，可见其分别为97.1%、80.0%和20