种玉米红壤微生物plfa多样性及稻秆微生物降解分析-diversity of microbial plfa in maize red soil and analysis of microbial degradation of rice stalks.docx

学位论文独创性声明 本人郑重声明： 1、坚持以 “求实、创新 ”的科学精神从事研究工作。 2 、本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成 果。 3、本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。 4、 本论文中除引文和致谢的内容外， 不包含其他人或其它机构已经 发表或撰写过的研究成果。 5、 其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢 意。 作者签名： 日 期： 学位论文使用授权声明 本人完全了解南京师范大学有关保留 、使用学位论文的规定，学 校 有权保留学位论文并向国家主管 部门或其指定机构送交论文的电子版和 纸质版；有权将学位论文用于非 赢利目的的少量复制并允许论文进入学 校图书馆被查阅；有权将学位论 文的内容编入有关数据库进行检索；有 权将学位论文的标题和摘要汇编 出版。保密的学位论文在解密后适用本 规定。 作者签名： 日 期： 文献综述 文献综述 PAGE PAGE 10 第 1 部分 文献综述 第 1 章 磷脂脂肪酸方法及其在土壤微生物多样性研究中的应用 1.1 土壤微生物多样性研究方法 生物多样性及其变化是全球变化研究的重要内容之一，包括物种多样性、遗 传（基因）多样性和生态系统多样性。土壤是微生物的大本营。土壤微生物是土 壤有机质和养分转化、循环的动力，它们参与土壤有机质的分解、腐殖质形成、 土壤养分的转化和循环等过程。土壤微生物群落的组成和活性不仅在很大程度上 决定了生物地球化学循环、土壤有机质的周转及土壤肥力和质量，也与植物的生 产力有关。土壤微生物可以敏感的指示气候和土壤环境条件的变化，土壤微生物 参数可能是最早用于反映土壤质量的生物指标[1]。因此，研究土壤微生物的多样 性可以提高人类利用和管理土壤环境的能力。 土壤微生物多样性包括在栖息地中微生物分类群的多样性和在微生物分类 群内的遗传多样性，以及包括群落结构的变异性、相互作用的复杂性、营养水平 （tropic level）和共位群（guild）数量（功能多样性）在内的生态多样性[2]。人 们对土壤微生物多样性的深入了解得益于研究方法的改进和完善，经历了由传统 研究方法向现代研究方法的过渡。传统的微生物培养法是根据目标微生物选择相 应的培养基培养微生物，然后根据微生物的生理生化特征及外观形态等进行分析 鉴定。这种方法对于衡量小群体多样性不失为一种快速的方法。但是，许多土壤 微生物是不可培养的，迄今为止分离鉴定到的微生物只占土壤微生物总数的 1%～10%[3]。且由于该方法人为限定了一些培养条件，与微生物真正生存条件不 尽相同，测定误差较大。传统的研究方法只能反映极少数微生物的信息，且对于 微生物群体相互作用研究的贡献很小。因此该方法只能作为一种辅助手段，与其 他先进方法结合起来才能较为客观地反映微生物群落结构的真实信息。 现在国际上普遍使用 Biolog 分析、磷脂脂肪酸（PLFA）分析和核酸分析 等多种现代技术，从不同角度来研究微生物多样性，这些方法可用于分析包括可 培养微生物和不可培养微生物在内的整个微生物群落。其中，Biolog 分析被用 作表征微生物群落的功能潜力，即被用于估计碳源利用模式等功能多样性；PLFA 分析用于表征土壤中数量上占优势的微生物，PLFA 的相对量可显示所指示微生 物的相对含量，PLFA 的总量可被用作指示土壤微生物的生物量。核酸分析方法 是目前最重要的土壤微生物多样性研究方法，该方法中最常用的是基于 PCR 的 核糖体 DNA（rDNA）分析方法（即 rDNA 的 DGGE/ TGGE 指纹分析方法）， 即从土壤微生物中扩增小亚基 rRNA 基因（16S rDNA 或 18S rDNA），扩增产 物用变性梯度凝胶电泳（DGGE）或温度梯度凝胶电泳（TGGE）分离，由 DGGE 或 TGGE 带谱及进一步对分离的 DNA 片段的克隆和序列分析，可了解土壤中 微生物的种类及群落结构[4]。这些现代研究方法的采用使我们能够获取土壤微生 物群落的更全面而完整的信息，较完全地了解环境过程和人类活动对土壤微生物 多样性的影响[5]。 1.2 磷脂脂肪酸分析方法在土壤微生物多样性研究中的应用 上世纪 70、80 年代，磷脂脂肪酸（Phospholipid fatty acid, PLFA）方法开始 用于土壤和环境样品中微生物生物量和群落结构多样性分析[6,7]。磷脂是几乎所 有微生物细胞膜的重要组成部分，细胞中磷脂的含量在自然条件下相对恒定，由 于不同的微生物类群其长链脂肪酸形式磷脂脂肪酸各不相同，因而可作为生物标 记物[8]。磷脂在细胞死亡后会迅速分解，因而只代表微生物群落中活体微生物生 物量和群落结构多样性。用 PLFA 方法分析微生物生物量和群落结构不需要进