玉米秸秆不同预处理方法对小克银汉霉油脂合成影响研究.docVIP

玉米秸秆不同预处理方法对小克银汉霉油脂合成影响研究 　　摘要：对玉米秸秆进行了理化及生物预处理方法的研究，结果表明：采用生物处理结合纤维素酶处理后的玉米秸秆基质，在不添加碳源时，刺孢小克银汉霉的油脂合成有明显的提高。但是，单一的理化及生物预处理方法对刺孢小克银汉霉油脂合成无显著的影响。 　　关键词：生物预处理；纤维素酶；油脂 　　 　　微生物固体发酵的生产水平除取决于生产菌种本身的的性能，还与生长的环境有关，必须赋予合适的培养条件，才能充分表达出其生产能力。因此，必须研究了解生产菌种对培养原料的要求，才能得到最佳的生产能力。本文主要采用玉米秸秆为摇瓶固态发酵培养基，通过研究生物、稀酸、稀碱、饱和石灰水以及微波等不同理化生物预处理方法后的玉米秸秆对菌种发酵的影响，得到了摇瓶固态发酵产油脂的一些结果。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 实验材料 　　实验菌株：刺孢小克银汉霉（编号B5），白腐菌（编号254、2538、EN、BP2），由本实验室分离筛选和保藏。 　　种子培养基：PDA斜面培养基，PDY液体种子培养基。 　　小克银汉霉固态发酵产油脂培养基：5g玉米秸秆，3.50g葡萄糖和0.15g硝酸铵，0.025g柠檬酸，0.020g硫酸锌，加水量为8mL，自然pH值，接种量为10mL，25℃静置培养8d白腐菌固态发酵培养基：准确称取玉米秸秆5.0克于100mL三角瓶中，加入12.5mL合成培养液。 　　合成培养液配方如下：（数值为体积比） 　　其中，酒石酸铵(22.0g/L)为氮源，大量元素每升含20g磷酸二氢钾、13.80g七水硫酸镁、1.00g氯化钙和0.60g氯化钠，微量元素每升含0.35g硫酸锰、60mg七水硫酸亚铁、110mg六水氯化钴、60mg七水硫酸锌、95mg五水硫酸铜、6mg12水钾明矾、6mg硼酸和6mg钼酸钠，VB1的质量分数为100mg/L。 　　1.2实验方法 　　1.2.1玉米秸秆预处理的方法 　　稀酸预处理：用2%的稀硫酸浸泡玉米秸秆，稀硫酸没过秸秆即可，室温条件下，48h后，将处理后的玉米秸秆过滤洗涤至中性，于60℃烘箱中烘干恒重。 　　稀碱预处理：分别用1%的氢氧化钠和饱和石灰水浸泡玉米秸秆，氢氧化钠和饱和石灰水没过秸秆即可，室温条件下，48h后，将处理后的玉米秸秆过滤洗涤至中性，于60℃烘箱中烘干恒重。 　　生物预处理玉米秸秆的方法：将白腐菌254、BP2、EN和2538分别接入到固体培养基中，培养30d，每5d下样后于60℃烘箱中烘干至恒重后，取出一半的样品用蒸馏水以1：5的固液比浸泡24h， 将滤液滤出后置于冰箱保存。另一半样品保存待用。 　　1.2.2木质纤维素的测定方法[1] 　　1.2.3油脂抽提方法[2] 　　1.2.4还原糖测定方法[3] 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1不同理化生物预处理玉米秸秆对微生物油脂合成的影响 　　2.1.1不同理化生物预处理前后玉米秸秆中木质纤维素组份的变化 　　不同的理化生物预处理方法对固体基质玉米秸秆中木质纤维素的成分变化影响是不同的，而玉米秸秆中木质纤维素的组成又会影响微生物的油脂合成。实验表明，白腐菌预处理主要是降解玉米秸秆中的半纤维素和纤维素，对木质素也有一定的降解，饱和石灰水和稀碱预处理则对木质素有较强的去除作用，稀酸预处理可去除半纤维素， 微波预处理主要针对纤维素进行解聚[4]。 　　从图1可知，当用理化生物预处理玉米秸秆后，玉米秸秆的组份会发生变化。不同的理化生物预处理方法可以得到不同组份的玉米秸秆。 　　2.1.2 不同理化生物预处理前后玉米秸秆中还原糖含量的变化 　　不同的理化生物预处理玉米秸秆后，玉米秸秆基质中的还原糖含量会发生变化，结果见图2。 　　由图2可知，微波处理和白腐菌生物预处理后，秸秆基质中的还原糖含量比未处理的玉米秸秆中的还原糖含量要高。而稀酸、稀碱及饱和石灰水预处理后，秸秆基质中的还原糖含量变化不大。这可能是因为在处理后的中和洗涤过程中，生成的葡萄糖被过滤洗涤掉了，所以导致预处理前后基质中的还原糖含量变化不大。 　　2.1.3不同理化生物预处理前后微生物油脂合成的变化 　　玉米秸秆作为菌株B5合成油脂的固体基质，其组分一方面直接影响固体培养基中所含的碳源，另一方面也决定菌株的生长环境以及对营养物质的利用。以B5作为出发菌株，分别以不同理化生物预处理方法前后的玉米秸秆直接作为固态发酵基质培养菌株B5，结果见图3。 　　用不同的理化生物方法预处理玉米秸秆后的基质培养产油菌7d后，收获发酵基质，并抽提油脂。图3结果表明，以理化生物预处理后的玉米秸秆直接作为发酵基质，油脂含量并没有显著增加。和未经预处理的玉米秸秆直接作为发酵基质相比，还下