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番茄抗叶霉病生理指标分析 　　摘要：为明确番茄叶霉病过敏性坏死反应中的活性氧代谢、细胞保护酶和激素含量的变化，通过对番茄叶霉病抗病材料HN19（含Cf-19）、HN42（含Cf-11）、Ontrio7516（含Cf-5）和感病材料 Money Maker（含Cf-0）分别接种叶霉菌生理小种1.2.3.4。结果表明：在接种72 h后，不亲和互作体系（抗病材料）出现坏死斑，番茄叶片活性氧的积累在接种后3、15 d出现2个峰值，而亲和互作体系（感病材料）只在接种后5 d产生1个峰值。不亲和互作体系中，第1次活性氧含量的高峰伴随着过敏性坏死反应（HR），表明高浓度的活性氧会导致细胞死亡。通过对亲和互作及非亲和互作体系中的细胞保护酶系（超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶）活性及激素（乙烯、水杨酸、脱落酸）含量分析发现，含有不同Cf基因的番茄品种在活性氧的积累、细胞保护酶活性及激素含量上存在相对统一的变化规律。 　　关键词：番茄叶霉病；过敏性坏死；ROS；保护酶系；激素 　　中图分类号： S436.412.1+9 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）09-0133-05 　　番茄（Solanum lycopersicum）是世界范围内分布的主要蔬菜作物，据联合国粮农组织统计，2012年全球番茄产量1.62亿t，创造了550亿美元的净利润[1]。番茄叶霉病（Cladosporium fulvum）是番茄保护地生产中的主要病害，被侵染后既降低番茄的产量，又影响果实的品质，有时甚至使植株死亡[2]。番茄Cf抗病基因介导对叶霉菌的抗性遵循基因对基因假说，抗病基因Cf与无毒基因Avr的相互作用使得抗病品种对生理小种产生特异性识别。有研究表明，Avr9/Cf-9和Avr4/Cf-4介导番茄产生的过敏坏死在产生速度、强度和组织特异性等方面均存在显著差异[3]。当番茄抗性品种被叶霉病菌侵染后，多数在侵染区域产生过敏性坏死反应（hypersensitive response，HR）[4]。有学者认为HR可能是细胞程序化死亡（programmed cell death，PCD）的一种形式[5]，因为植物体内发生HR时也表现出细胞凋亡的特征，如番茄原生质体用HR激发子花生四烯酸处理时也形成DNA梯形带[6]。番茄叶霉菌的侵染可以分为3个阶段：早期包括蛋白激酶激活[7]、活性氧分子（reactive oxygen species，ROS）产生[8-9]、膜质氧化和谷胱甘肽积累；中期包括脂肪氧化酶活性增强、电解液渗漏[10]和防御基因表达[11-12]；后期包括水杨酸积累、病症出现和细胞程序性死亡。HR中有多种信号分子参与，而活性氧是诱导HR的一个重要因子。当病原菌侵染寄主植物时，可使其体内活性氧产生与清除之间的动态平衡被打破[13]。在植物与病原菌大多数不亲和互作中，伴随HR的最显著特征就是氧化暴发，在短时间内积累大量的ROS，引起过敏性细胞死亡，在HR过程中发挥着重要的作用[14]。细胞保护酶系统主要包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）等，它们有清除ROS的作用，使其维持在正常水平，防止其对细胞膜的毒害[15]。综上所述，一方面ROS及细胞保护酶之间与植物过敏性抗病反应有关，因而被认为是植物抗病防卫反应的组成部分；另一方面，ROS作为信号物质参与植物对病原菌侵染的防御反应、细胞死亡和抗病基因表达的调控等[16-17]。另外有研究表明，植物激素水杨酸（salicylic acid，SA）、乙烯（ethylene，ETH）是植物抗病信号转导途径中的重要调控因子[18]。此外，植物激素脱落酸（abscisic acid，ABA）、生长素（auxin）、赤霉素（gibberellin，GA）、细胞分裂素（cytokinine，CK）和油菜素内酯（brassinosteroid，BR）等也被报道参与调控植物对病原菌的抗性[19-22]。 　　目前对于番茄叶霉菌的研究主要集中在抗病基因及其无毒基因的克隆，而很少集中在生理指标的测定上，本试验旨在探究番茄抗叶霉病菌侵染的过程中活性氧、细胞保护酶活性和激素水平的变化规律，以及亲和互作体系与非亲和互作体系的区别，以明确番茄抗叶霉病的生理机制，揭示其抗病机制，为番茄的抗叶霉病育种提供基础信息。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试番茄品种（表1）及供试叶霉菌生理小种1.2.3.4，由东北农业大学园艺学院番茄课题组提供；HN19（含Cf-19）、Ontrio7516（含Cf-5）、HN42（含Cf-11）与叶霉菌生理小种1.2.3.4均为不亲和互作（incompatible interaction），即表现为免疫或高抗；Money M