破壁及提取方法对蜂花粉营养及保健成分提取影响.docVIP

破壁及提取方法对蜂花粉营养及保健成分提取影响 　　摘 要：本文以茶花粉为原料，利用热水法、纤维素酶法、碱性蛋白酶法和双酶法（即纤维素酶和碱性蛋白酶联合处理）4种方法对花粉进行破壁处理，采用温水、温水超声波、酸法、酸法超声波、乙醇、乙醇超声波、温水乙醇、酸法乙醇8种方法对破壁后的花粉进行提取，研究破壁及提取方法对蜂花粉营养及保健成分提取的影响。 　　关键词：茶花蜂花粉 破壁 纤维素酶 碱性蛋白酶 营养成分 　　花粉是指裸子植物和被子植物的雄性配体[1]，它包含着孕育一个植物新生命所需的营养成分[2]。蜂花粉是蜜蜂采集植物的花粉加上蜜蜂自身的腺上分泌物、唾液和花粉形成的不规则扁圆形团状物[3]，包括22种氨基酸、14种维生素和30多种微量元素以及多种活性蛋白、核酸、激素、黄酮类化合物及其他的活性物质[4]。从成分上来看，蜂花粉中蛋白质为7%～35%，碳水化合物为40%～50%，脂肪为5%～10%[5]。蜂花粉作为营养型、功能型、保健型食品原料日益受到重视[6]。花粉的细胞壁非常坚韧，具有耐酸、耐碱、耐温、耐压等特性，不仅影响蜂花粉营养成分的吸收利用，也阻止了蜂花粉提取时营养物质的释放，成为限制蜂花粉的深层开发利用的一个关键技术难题[7]。 　　相关研究表明，通过对花粉进行破壁处理，可以提高花粉的营养利用效率[8]。近年，花粉破壁的研究成为蜂花粉研究的热点问题，人们相继报道了超声波破壁法[9]、酵母发酵法[10]、酶解破壁法[11]和渗透压破壁法[12，13]等方法，但针对各种花粉破壁方法对花粉内容物的提取及其营养保健成分的影响则缺乏系统研究。目前，在生产中常用的花粉破壁方法是热水破壁及酶解破壁，其中酶解常用纤维素酶、蛋白酶及复合酶等[3]，如郝晓亮等[14]采用复合纤维素酶对松花粉的破壁进行了研究，杨晓萍等[15]发现由蛋白酶、果胶酶和纤维素酶组成的复合酶能有效释放花粉内溶物，董捷等[3，6]研究发现复合蛋白酶有利于花粉萌发孔的打开。本文的主要目的是比较常用破壁方法（热水破壁法、蛋白酶水解法、纤维素酶水解法及复合酶水解法）对蜂花粉营养保健成分提取的影响，为蜂花粉的精深加工提供理论参考。 　　1 材料与方法 　　1.1原料及药品 　　茶花粉（含水量12%，粉碎过60目筛，-20℃保存备用）；分析纯氢氧化钠、无水乙醇、无水乙醚、浓硫酸、盐酸、硼酸、柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钾等（国药集团化学试剂有限公司）；纤维素酶和碱性蛋白酶（诺维信（中国）生物技术有限公司）。 　　1.2仪器设备 　　HH-4型数显恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；LA120S型分析天平和BS223S电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；LXJ-IIB型低速大容量离心机（上海安亭科学仪器厂）；FE-20台式酸度测定仪（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；WCJ-802磁力加热搅拌器（国华电器有限公司）；7200可见分光光度计（尤尼可分析仪器设备有限公司）；FW80高速万能粉碎机（天津泰斯特仪器设备有限公司）；101-3B型电热鼓风干燥箱（上海市实验仪器总厂）；8100弗斯凯氏定氮仪（北京中仪友信科技有限公司）。 　　1.3花粉的破壁处理 　　（1）加热破壁处理。称取花粉40g，按料水比1：5加水，加热煮沸，保持30min，4000r/min离心10min，收集上清液和沉淀。 　　（2）纤维素酶破壁处理。称取花粉40g，按料水比1：5加入pH4.5的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。按花粉称取量15%的比例加入纤维素酶，在55℃下，酶解5h，4000r/min离心10min，分别收集上清液和沉淀。 　　（3）碱性蛋白酶破壁处理。称取花粉40g，按料水比1：5加入pH8.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。按花粉称取量1%的比例加入碱性蛋白酶，在55℃下，酶解3h，4000r/min离心10min，分别收集上清液和沉淀。 　　（4）双酶联合破壁处理。称取花粉40g，按料水比1：5加水，调pH值到pH4.5，按花粉称取量15%的比例加入纤维素酶，在55℃下，酶解5h，将溶液的pH调至8.0，按花粉称取量1%的比例加入碱性蛋白酶，在55℃下，继续酶解3h，4000r/min离心10min，分别收集上清液和沉淀。 　　1.4花粉营养保健成分的提取方法 　　以各种破壁处理后所得的沉淀进行提取，收集提取液并和破壁上清液合并，测定各项指标。提取方法如下： 　　（1）温水提取。按料水比1：5加水，加热至50℃，保持30min，4000r/min离心10min，收集提取液。 　　（2）温水超声波提取。按料水比1：5加水，加热至50℃，超声波提取30min，4000r/min离心10min，收集提取液。 　　（3）酸法提取。按料水