碲化镉量子点自组装膜构建及其对溶菌酶界面传感.docVIP

碲化镉量子点自组装膜构建及其对溶菌酶界面传感 　　摘 要 利用自组装膜（SAMs）技术在石英片表面构建了碲化镉量子点SAMs。考察了组装液浓度、组装时间和聚电解质组装层数等组装条件对膜发光性能的影响，并用紫外可见吸收光谱仪、荧光光谱仪、共聚焦荧光显微镜和原子力显微镜对其进行了表征。基于溶菌酶对该SAMs的荧光具有猝灭效应，建立了一种快速灵敏测定痕量溶菌酶的界面荧光分析法，线性响应范围为0.10～10.19 　　 g/L，检出限为48 ng/L，灵敏度较纯液相分析提高3个数量级。所构建的SAMs具有良好的稳定性和可逆再生性，在0.1 mol/L NaCl溶液（pH 12.0）中浸泡1 h即可实现再生。本方法用于人血清中溶菌酶的测定，回收率为85.7%～105.5%。 　　关键词 碲化镉；量子点； 溶菌酶；自组装膜；荧光分析 　　 　　1 引 言?? 　　量子点（QDs）作为一种新型荧光探针，已被广泛应用于金属离子和生物分子的检测中。自组装膜（Self-assembled monolayers，SAMs）结合了LB（Langmuir blodgett）膜的分子有序性和化学吸附的稳定性，加上其本身的针孔现象、离子门作用及较好的生物兼容性，使其具有作为传感膜的独特优势。将QDs以适当的方式与无机或有机基体复合组装到基底表面形成传感膜，不仅可以极大地提高分析检测的灵敏度，而且在一定条件下可以再生重复使用。 溶菌酶（Lysozyme）是一种能使致病菌中黏多糖水解的碱性酶，常用于治疗慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡和水痘等疾病，同时也是多种疾病的标志物。因此，溶菌酶的分析检测对医药、疾病的预警和诊断具有重要意义。目前，基于QDs与溶菌酶相互作用而进行溶菌酶检测的报道不多，而且采用的都是纯液相分析，灵敏度不高，响应时间长且不可再生。本研究构建了发光性能稳定的碲化镉量子点自组装膜（CdTe QDs SAMs）。基于溶菌酶对此SAMs的荧光具有猝灭效应，建立了一种快速灵敏且可逆再生测定痕量溶菌酶的界面荧光分析法。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂?? 　　F-4500型荧光光谱仪（日本Hitachi公司）；UV-2401C型紫外分光光度计（日本Shimadzu公司）；TCS SP5型共聚焦荧光显微镜（德国Lecia公司）；Nanoscope 3D ADC5原子力显微镜（美国Veeco公司）。CdCl??2#8226;2.5H??2O、碲粉（99.999%）、巯基乙酸（TGA）、溶菌酶（生化试剂）、KBH??4 （上海国药集团化学试剂有限公司）；聚二甲基二烯丙基氯化铵（PDDA，北京百灵威化学技术有限公司）；聚苯乙烯磺酸钠（PSS，美国Acros公司）。实验用水为二次蒸馏水。 　　2.2 KHTe的配制?? 　　将2 mmol碲粉和4 mmol KBH??4移入5 mL水中，通高纯氮气15 min，密封，4 ℃下反应过夜，备用。 　　2.3 CdTe QDs的制备?? 　　参照文献\方法合成。将4 mmol CdCl??2#8226;2.5H??2O和10 mmol TGA溶于100 mL水中，用2 mol/L NaOH调至pH 10.5，在高纯氮气保护和剧烈搅拌下迅速加入新配制的KHTe溶液，100 ℃下加热回流。 　　2.4 石英片预处理?? 　　将石英片（Quartz）依次在铬酸洗液、水、无水乙醇中超声清洗10 min；然后在Piranha溶液（98% H??2SO??4-30% H??2O??2, 7∶3, V/V）中80 ℃超声清洗30 min；最后用水超声清洗10 min，以高纯氮气吹干。 　　2.5 Quartz/PDDA/PSS/PDDA/PSS/PDDA/CdTe SAMs的制备?? 　　经预处理后的石英片依次在1% （V/V） PDDA、1 g/L PSS溶液中交替组装1 h，得到前体膜Quartz/PDDA/PSS/PDDA/PSS/PDDA; 再在CdTe QDs（8 mmol/L，以Cd2＋浓度计）溶液中组装30 min，即得Quartz/PDDA/PSS/PDDA/PSS/PDDA/CdTe SAMs（以下简称CdTe SAMs）。每次组装完成后，石英片用水淋洗、高纯氮气吹干后，再进行下一层组装。组装过程如图1所示。 　　 图1 CdTe SAMs自组装示意图 　　Fig．1 Schematic diagram of CdTe self-assembled monolayers （SAMs） 　　2.6 CdTe SAMs荧光光谱测定?? 　　荧光光谱采用Hitachi F-4500荧光分光光度计测定，将CdTe SAMs置于荧光池中，调整膜位使其与入射光角度为50°，